羊小反芻獸疫病毒抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
使用說明書
【產品名稱】
通用名：羊小反芻獸疫病毒抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Goat Peste des Petits Ruminants Virus （ELISA）

【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【預期用途】 小反芻獸疫是由小反芻獸疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV）引起的一種急性接觸性傳染病，其特征為口腔、舌粘膜糜爛、流淚、流鼻液。本病的易感動物為山羊，也可感染綿羊、白尾鹿等，但對牛無感染性。
本試劑用于檢測羊血清中小反芻獸疫病毒抗體，可用于小反芻獸疫疫苗免疫效果評價。

【原     理】
本試劑盒由預包被小反芻獸疫病毒重組抗原的酶標板、抗體工作液、酶標記物及其他配套試劑組成，應用競爭酶聯免疫法（ELISA）原理檢測羊血清、血漿樣本中小反芻獸疫病毒抗體。實驗時在酶標板中加入待檢樣本和抗體工作液，經溫育后洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，若樣品中含有小反芻病毒抗體則將阻斷抗體工作液與酶標板上抗原結合，從而使后續反應不出現顯色；反之則出現顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有小反芻獸疫病毒抗體。

【試劑盒組成】 

序號	名稱	規格/96T×1	規格/96T×2	規格/96T×5
1	酶標記物	11ml×1(紅蓋)	11ml×2(紅蓋)	26ml×2(紅蓋)
2	抗體工作液	6ml×1(藍蓋)	11ml×1(藍蓋)	26ml×1(藍蓋)
3	20X濃縮洗滌液	40ml×1(白蓋)	40ml×1(白蓋)	200ml×1(透明)
4	底物液A	6ml×1(白蓋)	11ml×1(白蓋)	26ml×1(白蓋)
5	底物液B	6ml×1(黑蓋)	11ml×1(棕蓋)	26ml×1(黑蓋)
6	終止液	6ml×1(黃蓋)	11ml×1(黃蓋)	26ml×1(黃蓋)
7	陽性對照	1.0 ml×1(紅蓋)	1.5 ml×1(紅蓋)	2.0 ml×1(紅蓋)
8	陰性對照	1.0 ml×1(綠蓋)	1.5 ml×1(綠蓋)	2.0 ml×1(綠蓋)
9	酶標板	96T×1	96T×2	96T×5
10	蓋板膜	1	2	5
11	自封袋	1	1	2
12	說明書	1	1	1

 
【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。

【樣品準備】
1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.待檢血清樣本恢復室溫、混勻待用。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成 工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔先加入40μl 工作洗滌液,再加入10μl血清樣本。
4.每孔加抗體工作液50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水浴）避光反應30分鐘。
5.甩去孔內液體，每孔加350μl 工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶標記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應15分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

【參考值】實驗正常的情況下，陰性對照吸光值≥1.0，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×50%。

【檢驗結果的解釋】
1. PI（阻斷率）=（1- 陰性對照平均A值(樣本A值)）×100%，PI≥50%為陽性；PI＜50%為陰性。
2.本實驗結果為陰性表明羊只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。

【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測羊血清中小反芻獸疫病毒抗體，根據PI值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。