介紹:
突觸連接的改變與幾乎所有的腦部疾病有關(guān)。尤其是，突觸丟失是破壞認知功能的腦部疾病的一個特別嚴重的問題，例如精神分裂癥和阿爾茨海默病。高內(nèi)涵、基于初級神經(jīng)元的篩選平臺作為研究計劃的一部分已被研發(fā)出來，其旨在發(fā)現(xiàn)引發(fā)神經(jīng)連接數(shù)量增加的新機制以作為對抗這些疾病的策略，同時促進引發(fā)突觸連接數(shù)量增加的新化學(xué)探針的研發(fā)。這些探針將作為未來幾代治療各種腦部疾病藥物的開發(fā)平臺。

作為高內(nèi)涵篩選平臺的一部分，為了確保批次間結(jié)果的可重復(fù)性，必須保證所有細胞接種一致，并且在實驗期間保持細胞活性。本應(yīng)用說明介紹了一個實驗程序，強調(diào)了MANTIS? 液體處理器作為一種精確、可靠和強大的解決方案的適用性，即使是最敏感的原代神經(jīng)元細胞也可以進行分配。

材料: 

1x PDL 涂層 1536 孔 Aurora 微孔板

50 mL 培養(yǎng)基，含有:

?  1X Neurobasal-A 培養(yǎng)基

?  2.5% Glutamax-I

?  02% Gentamicin 試劑 

?  2% B-27 補充劑

?  10 uM FUDR

從 P0 小鼠幼崽中提取的5x106 個原代皮層細胞 

FORMULATRIX? MANTIS 液體處理器

Eppendorf 5810 R 離心機

GE IN Cell Analyzer 6000 基于激光的共聚焦成像平臺

方法:

1. 神經(jīng)元細胞在 1536 孔 Aurora 微孔板上接種

2. 將含有 3 x 103 個細胞的 15 μL 培養(yǎng)基分配到 1536 個孔中的每個孔中

3. 將微孔板在 200 g 離心力下離心 1 分鐘

4. 細胞在不飼養(yǎng)的情況下培養(yǎng) 7 天 

5. 使用 IN Cell Analyzer 6000 通過 DIV7 Phase Contrast 對細胞進行計數(shù)

結(jié)果:

培養(yǎng) 7 天后，平均相細胞計數(shù)與 96 或 384 孔板相當，整個 1536 孔板的細胞計數(shù)均勻性 CV 小于 10%。

圖 1. 1536 孔 Aurora 微孔板單孔中的原代神經(jīng)元細胞

總結(jié):
即使是分配至小體積的 1536 孔板，F(xiàn)ormulatrix MANTIS 也能夠一致地分配細胞。此外，通過使用溫和、低剪切力的分配技術(shù)，該儀器可延長體外細胞活性。

致謝: 

這項工作是由佛羅里達州木星斯克里普斯研究所的 Chris Hubbs 完成的。斯克里普斯研究所 (TSRI) - 世界上最大的私人非營利研究機構(gòu)之一——站在基礎(chǔ)生物醫(yī)學(xué)科學(xué)的前沿，是醫(yī)學(xué)研究的重要組成部分，旨在理解生命的最基本過程。在過去的幾十年中，該研究所對為健康和人類狀況改善做出重大貢獻方面進行了長期的記錄。