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抗豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）單克隆抗體的制備_abio生物試劑品牌網

abiopp6個月前 (06-22)技術77

抗豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）單克隆抗體相關參數解析
一、TGEV 毒株型號區別豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）屬于冠狀病毒科，其毒株分型主要基于基因序列差異和抗原性差異，常見毒株類型及特點如下：

毒株類型	代表株	基因特征	抗原性特點	流行區域 / 時間
經典毒株	Purdue-115	ORF3 基因完整，S 蛋白受體結合域（RBD）保守性高	與早期疫苗株抗原匹配度高	早期北美、歐洲流行株
變異毒株	TH-98	ORF3 基因缺失（ΔORF3），S 蛋白出現氨基酸突變（如 S1 亞基 D407N 突變）	抗原性與經典毒株存在差異，可逃逸部分抗體	20 世紀 90 年代后亞洲流行株
重組毒株	China-2012	S 蛋白與豬德爾塔冠狀病毒（PDCoV）存在基因重組，抗原表位多樣性增加	交叉反應性降低，需新型抗體識別	近年中國部分地區流行株
疫苗衍生毒株	MLV（弱毒疫苗株）	經過細胞傳代致弱，S 蛋白部分抗原表位弱化，免疫原性保留但致病性降低	主要用于疫苗制備，與野毒株抗原性部分重疊	全球疫苗生產用毒株

二、單克隆抗體制備流程抗 TGEV 單克隆抗體制備通常采用雜交瘤技術，核心步驟及關鍵參數如下： 1. 抗原制備

抗原類型：
- 全病毒抗原（滅活或純化 TGEV，如 Purdue-115 株）：誘導廣譜抗體，但需生物安全防護（BSL-2 實驗室）。
- 重組蛋白抗原（如 S 蛋白 RBD 區、N 蛋白）：安全性高，抗原表位明確，常用于特異性抗體篩選。
免疫方案：
- 動物模型：BALB/c 小鼠（6-8 周齡），腹腔注射抗原（10-50 μg / 次），佐劑（弗氏完全 / 不完全佐劑）輔助。
- 免疫周期：3-4 次基礎免疫（間隔 2 周）+ 1 次加強免疫（融合前 3 天靜脈注射）。

2. 細胞融合與篩選

融合步驟：
- 脾細胞（免疫小鼠）與骨髓瘤細胞（如 SP2/0）按 5:1 比例混合，PEG1500 誘導融合。
- 篩選培養基：HAT 培養基（含次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶），淘汰未融合細胞。
抗體篩選：
- 間接 ELISA：以 TGEV 抗原包被，篩選陽性雜交瘤細胞株。
- 中和試驗（Neutralization Assay）：檢測抗體對 TGEV 感染的中和能力（如 TCID??抑制率）。
- 毒株交叉反應性測試：用不同型毒株（如經典株、變異株）驗證抗體特異性。

3. 克隆化與抗體生產

有限稀釋法：將雜交瘤細胞稀釋至 0.5 細胞 / 孔，單克隆培養，確保單一抗體來源。
抗體生產：
- 小鼠腹腔誘生法：注射雜交瘤細胞，收集腹水，抗體濃度可達 1-10 mg/mL。
- 懸浮培養法：無血清培養基大規模培養，適合工業化生產，抗體純度高（需親和層析純化）。

三、單克隆抗體特異性參數
1. 抗原識別特異性

表位類型：
- 中和表位：主要位于 S 蛋白 RBD 區（如氨基酸殘基 380-440），抗體可阻斷病毒與宿主細胞受體（氨肽酶 N）結合。
- 非中和表位：常見于 N 蛋白、M 蛋白，用于病毒檢測（如 ELISA、免疫熒光），但無中和活性。
毒株交叉反應性：
- 經典株抗體（如針對 Purdue-115 S 蛋白）對變異株（如 TH-98）中和效率可能下降 50% 以上。
- 新型變異株抗體（如針對 China-2012 S 蛋白）需通過中和試驗驗證對不同毒株的交叉保護力。

2. 功能活性參數

中和效價（IC??）：
- 指抑制 50% 病毒感染所需的抗體濃度，經典株抗體 IC??通常為 0.1-1 μg/mL，變異株抗體可能需更高濃度（如 1-10 μg/mL）。
抗體依賴性細胞介導的細胞毒性（ADCC）：
- 部分抗體可通過 Fc 段激活 NK 細胞，增強對病毒感染細胞的殺傷，需通過流式細胞術檢測。

3. 應用場景特異性

四、不同毒株抗體的應用差異

抗體類型	針對毒株	中和活性	交叉反應性	主要應用
經典株特異性抗體	Purdue-115	高（對經典株）	對變異株低	早期疫苗效果評估、經典株檢測
變異株廣譜抗體	TH-98、China-2012	高（對變異株）	部分覆蓋經典株	流行毒株診斷、新型疫苗研發
N 蛋白通用抗體	所有毒株	無中和活性	高（保守抗原）	病毒總載量檢測（如 ELISA）