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非洲豬瘟病毒P72蛋白抗體（單克隆抗體）在 ASF 防控中的應用_abio生物試劑品牌網

abiopp6個月前 (07-08)技術45

非洲豬瘟病毒（ASFV）的 P72 蛋白（由 B646L 基因編碼）是病毒最主要的結構蛋白，構成病毒粒子的衣殼，具有極高的保守性和免疫原性，是非洲豬瘟（ASF）診斷、病毒檢測及基礎研究的核心靶標之一。針對 P72 蛋白的抗體（尤其是單克隆抗體）在 ASF 防控中應用廣泛，以下從多維度詳細解析：
一、P72 蛋白的核心特征 P72 蛋白是 ASFV 衣殼的主要組成成分，約占病毒粒子總蛋白的 30%，其功能包括：

維持病毒粒子的結構穩定性；
參與病毒對宿主細胞的識別與吸附；
作為病毒最保守的蛋白之一，在不同基因型 ASFV 中氨基酸序列同源性高達 90% 以上，是跨毒株檢測的理想靶標。

二、抗 P72 蛋白抗體的結構抗 P72 蛋白的抗體（單克隆或多克隆）均屬于免疫球蛋白（Ig），以應用最廣的單克隆抗體為例： 1. 基本結構

由兩條重鏈（H 鏈）和兩條輕鏈（L 鏈）通過二硫鍵連接，形成典型的 “Y” 型結構。
分子量約 150 kDa（IgG 型），其中重鏈約 50 kDa，輕鏈約 25 kDa。

2. 功能區域

可變區（V 區）：位于 “Y” 型頂端，由重鏈可變區（VH）和輕鏈可變區（VL）組成，負責特異性識別 P72 蛋白的抗原表位（線性表位或構象表位），是抗體靶向結合的關鍵區域。
恒定區（C 區）：包括重鏈恒定區（CH1-CH3）和輕鏈恒定區（CL），決定抗體的類型（如 IgG1、IgG2a 等亞型）及效應功能（如結合 Fc 受體、激活補體等）。

3. 常見類型

單克隆抗體以 IgG 型為主（如小鼠 IgG1、IgG2b），因其穩定性強、親和力高，適合用于診斷試劑；
多克隆抗體多為兔源或羊源 IgG，可識別 P72 的多個表位，靈敏度更高。

三、對應 P72 蛋白的 ASFV 毒株由于 P72 蛋白的高保守性，抗 P72 抗體可廣泛識別幾乎所有 ASFV 毒株，包括：

基因 Ⅱ 型：全球主流流行株（如 Georgia 2007 株、我國流行的變異株）；
基因 Ⅰ 型：西非、歐洲經典株（如 L60 株、BA71V 株）；
其他基因型：基因 Ⅲ-ⅩⅧ 型（非洲地方性流行株）。
其跨毒株識別能力源于 P72 蛋白的高度保守性（不同基因型間氨基酸序列同源性 > 90%），是 ASF 通用診斷的核心依據。

四、抗 P72 蛋白抗體的制備方法
1. 單克隆抗體制備

免疫原：通過原核表達（大腸桿菌）或真核表達（昆蟲細胞、HEK293）系統重組表達 P72 全長蛋白或優勢抗原片段（如第 1-300 位氨基酸），純化后作為免疫原。
雜交瘤構建：
1. 用重組 P72 蛋白免疫 Balb/c 小鼠，多次免疫后取脾臟淋巴細胞；
2. 與骨髓瘤細胞（如 SP2/0）融合，通過 HAT 選擇培養基篩選雜交瘤細胞；
3. 采用 ELISA、Western blot 等方法篩選能特異性結合 P72 蛋白的陽性克隆，經有限稀釋法克隆化，獲得穩定分泌抗體的細胞株。
抗體純化：從雜交瘤細胞上清或小鼠腹水（腹腔接種雜交瘤細胞）中，通過蛋白 A/G 親和層析純化，純度可達 95% 以上。

2. 多克隆抗體制備

以重組 P72 蛋白免疫兔、羊等動物，定期采血收集抗血清；
用 P72 蛋白偶聯的親和層析柱純化血清，去除非特異性抗體，獲得多克隆抗體。其優勢是可識別多個表位，靈敏度高，但批次差異較大。

五、抗體的特異性抗 P72 蛋白抗體的特異性是其應用的核心，主要體現在：

與 ASFV 的特異性結合：僅識別 ASFV 感染細胞或病毒粒子中的 P72 蛋白，不與其他豬源病毒（如豬瘟病毒、藍耳病病毒、偽狂犬病病毒等）發生交叉反應，確保診斷的專一性。
表位特異性：單克隆抗體通常針對 P72 蛋白的單一表位（如線性表位 “Gly120-Ser135” 或構象表位），多克隆抗體則覆蓋多個表位，可根據需求組合使用（如雙抗體夾心法中，捕獲抗體和檢測抗體針對不同表位，提高檢測特異性）。

六、交叉反應性（交叉率）

與其他病毒的交叉率：極低（通常 < 0.1%），因 P72 蛋白是 ASFV 特有，與其他病毒無同源序列，故無交叉反應。
與不同 ASFV 毒株的交叉率：極高（通常 > 95%），由于 P72 蛋白高度保守，優質抗體可識別所有已知基因型毒株。僅當個別毒株的 P72 抗原表位發生罕見突變（如氨基酸替換）時，可能導致交叉率下降（但此類情況極少）。

七、關鍵性能參數