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Thp-1人單核細(xì)胞白血病的培養(yǎng)復(fù)蘇和常見問題解答_abio生物試劑品牌網(wǎng)

abiopp5個月前 (08-05)技術(shù)51
細(xì)胞介紹】

THP-1是一種人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系,最初從一位1歲患有急性單核細(xì)胞白血病的男孩的外周血中分離出來的單核細(xì)胞。該細(xì)胞對乳汁珠和激活的紅細(xì)胞有吞噬作用,無表面和胞質(zhì)免疫球蛋白。 可以用佛波醇 TPA誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化。表達(dá)C3R和FcR;可作為轉(zhuǎn)染宿主。也因其能夠被誘導(dǎo)分化成單核/巨噬細(xì)胞,所以在免疫學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用。例如:巨噬細(xì)胞分化與炎癥模型、基因編輯研究、免疫調(diào)節(jié)作用研究、疾病模型構(gòu)建與藥物篩選、STING激動劑篩選模型、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期研究、表觀遺傳調(diào)控研究等。這些應(yīng)用展示了THP-1細(xì)胞系在免疫學(xué)研究中的多樣性和重要性,為理解免疫調(diào)節(jié)和疾病機制提供了寶貴的工具。

細(xì)胞生長狀態(tài):THP-1細(xì)胞是懸浮生長并形成松散的團塊,幾乎沒有細(xì)胞附著,細(xì)胞倍增時間為60-70h。

形態(tài):在Wright-giemsa染色涂片中,即有圓形細(xì)胞也有一些多邊形細(xì)胞,直徑為12-14μM,細(xì)胞中有少量嗜堿性的胞漿,胞漿中含有少量嗜藍(lán)顆粒和少量液泡,細(xì)胞核呈鋸齒狀,形狀不規(guī)則。

細(xì)胞名稱:Thp-1人單核細(xì)胞白血病
細(xì)胞別稱:THP1; THP 1; THPI; THP-1(ATCC); Tohoku Hospital Pediatrics-1
產(chǎn)品貨號:ZQ0086
生長特性懸浮、低密度容易聚團,高密度分散
培養(yǎng)條件 RPMI-1640(中喬新舟貨號:ZQ-200)+10%胎牛血清(中喬新舟貨號:ZQ0500)+1%雙抗(中喬新舟貨號:CSP006)+β-Mer 終濃度:0.05mM(中喬新舟貨號:CSP005,例:500ml添加500ul)
完全培養(yǎng)基貨號:ZM0086

【細(xì)胞傳代】

該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞。根據(jù)我司培養(yǎng)經(jīng)驗
A:當(dāng)培養(yǎng)基顏色比較黃時,建議離心換液,細(xì)胞沉淀用手指彈松后添加完全培養(yǎng)基均勻移入兩個新的 T25培養(yǎng)瓶中維續(xù)培養(yǎng)即可(1:2 傳代)。
B:細(xì)胞數(shù)量多,液體不黃,建議使用【半換液法】添加一半新培養(yǎng)基并進行分瓶(1:2傳)。

THP-1細(xì)胞為懸浮細(xì)胞且具有低密度依賴性,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到8×105個活細(xì)胞/ mL時需要進行傳代。細(xì)胞密度不要超過1×106活細(xì)胞/ mL。比例一般為1:2-4,可以分瓶后補充培養(yǎng)液,不需要離心,t25培養(yǎng)瓶分瓶后補充新鮮完全培養(yǎng)基到7ml,如果對懸浮細(xì)胞密度把控不好可以,最佳的方式是進行細(xì)胞計數(shù)。培養(yǎng)一周左右可以離心一次,以去除一些死細(xì)胞。
 
該細(xì)胞在培養(yǎng)過程中,可能會有少量貼壁或聚集成小團生長,屬于正常情況。傳代時可以輕輕打散,如少許細(xì)胞已貼壁則傳代時丟棄,小團生長的細(xì)胞正常傳代培養(yǎng)即可。

該細(xì)胞對細(xì)胞密度較為敏感,培養(yǎng)、傳代時請注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍。

該細(xì)胞較難復(fù)蘇,復(fù)蘇后需要約7天左右才可能恢復(fù)至正常狀態(tài)。剛復(fù)蘇后,細(xì)胞生長緩慢且會出現(xiàn)黑色細(xì)胞碎片,少量細(xì)胞碎片不影響細(xì)胞正常生長,待細(xì)胞恢復(fù)生長后用半換液法可以稀釋碎片。

細(xì)胞凍存時務(wù)請?zhí)岣呒?xì)胞密度,建議1個T25培養(yǎng)瓶中含有3-5×106細(xì)胞量時凍存一支。
該細(xì)胞對血清質(zhì)量較為敏感,我司建議您使用優(yōu)質(zhì)胎牛血清進行培養(yǎng)或選擇訂購我司配套THP-1完全培養(yǎng)液。

【細(xì)胞凍存】

1、細(xì)胞密度80%以上,活細(xì)胞百分率達(dá)95%以上時,將細(xì)胞按照以上步驟進行消化收集細(xì)胞沉淀進行凍存。
2、細(xì)胞沉淀用適量通用含血清型程序凍存液(貨號:CSP169)重懸, 建議一瓶T25細(xì)胞凍存一管(1ml/管),然后將分裝好的細(xì)胞凍存管進行程序性降溫凍存,凍存細(xì)胞降溫程序(2-8℃,放置40min;-20℃,放置30min-60min,-80℃放置一天后轉(zhuǎn)移至液氮保存)或使用程序降溫盒降溫后,再轉(zhuǎn)至液氨罐中長期保存。
 
【細(xì)胞復(fù)蘇】

THP-1細(xì)胞復(fù)蘇后通常需要3-5天恢復(fù)狀態(tài),細(xì)胞對密度有一定依賴性,如果復(fù)蘇時離心去除了凍存液,建議復(fù)蘇后48小時內(nèi)不要進行操作。密度低時細(xì)胞會抱團生長屬于細(xì)胞快速增殖生長的一個階段,是正常情況。

凍管細(xì)胞復(fù)蘇:
1、液氮取出的細(xì)胞放入干冰中轉(zhuǎn)移至細(xì)胞房,提前準(zhǔn)備好完全培養(yǎng)基,離心管等試劑和耗材。
2、凍管細(xì)胞在37°C水浴中迅速解凍(大約1-2分鐘)。為了減少污染的可能性,保持凍管瓶蓋在水浴液面之上。 一旦大部分內(nèi)容物解凍,立即將凍管移出水浴,70%的乙醇消毒凍管外壁。
3、將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到含3-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中,輕輕混勻,離心(125 g,3~5分鐘)1000-1200rmp去除培養(yǎng)基, 管底細(xì)胞沉淀用手指彈松,再添加3ml完全培養(yǎng)基至離心管內(nèi)混勻細(xì)胞并進行計數(shù)。
4、用適量完全培養(yǎng)基將細(xì)胞密度調(diào)整至0.6-2.0X105,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,再將瓶轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。T25培養(yǎng)瓶建議添加5-7ml完全培養(yǎng)基。當(dāng)密度達(dá)到80%以上時傳代。
 
【常見問題】

1. THP-1細(xì)胞培養(yǎng)過程中貼壁問題?

1)THP-1細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況,THP-1細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)自發(fā)貼壁,可以輕吹收集細(xì)胞或者丟棄貼壁部分細(xì)胞;
2)當(dāng)貼壁細(xì)胞比例高于20%,建議排查細(xì)胞生長培養(yǎng)箱溫度及CO2濃度、培養(yǎng)基成分(營養(yǎng)體系的酸堿性)、以及培養(yǎng)瓶可用非TC處理過的培養(yǎng)瓶,不利于細(xì)胞貼壁;
3)更換血清可能會導(dǎo)致THP-1細(xì)胞很容易分化成為巨噬細(xì)胞。

2. THP-1細(xì)胞在培養(yǎng)過程中的聚團問題

1)THP-1細(xì)胞在密度較稀時,有少量細(xì)胞聚團屬于正常現(xiàn)象,不建議將聚團的細(xì)胞吹散,等細(xì)胞密度增高時,細(xì)胞會自然分散開;
2)細(xì)胞密度高時,聚團細(xì)胞比例高于30%時,并且細(xì)胞團呈糜爛狀,細(xì)胞之間界限不清,胞體質(zhì)膜有潰爛感,這種情況下的細(xì)胞聚團是異常的,建議排查營養(yǎng)體系的酸堿性、培養(yǎng)箱環(huán)境問題、更換血清品牌或增大血清比例(不超過20%)有助于解決聚團問題。

3.THP-1復(fù)蘇不起來怎么辦

1)THP-1細(xì)胞對凍存條件比較敏感,復(fù)蘇存活率受凍存體系、凍存和復(fù)蘇流程影響比較大。該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低,凍存時請酌情提高細(xì)胞量,凍存時活細(xì)胞密度不能低于100萬-300萬/mL,同時復(fù)蘇密度也有依賴性,細(xì)胞復(fù)蘇后需要培養(yǎng)3-5天狀態(tài)才能恢復(fù),如有細(xì)胞碎片,待細(xì)胞密度增大后通過低速離心去除。
2)該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,在培養(yǎng)時更喜歡溫和處理,細(xì)胞密度低時,培養(yǎng)時盡量少對細(xì)胞進行離心處理以此造成對細(xì)胞的傷害。換液時不要全培養(yǎng)基更換。
3 )THP-1細(xì)胞中需要添加β-巰基乙醇,現(xiàn)用現(xiàn)配,不可直接添加至完培中長期儲存,會影響β-巰基乙醇的穩(wěn)定性。

4. 培養(yǎng)基里一定要加β-巰基乙醇( β-mercaptoethanol)嗎?
β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補充劑,有抗氧化的作用,可減少氧化應(yīng)激對THP-1細(xì)胞的影響;當(dāng)細(xì)胞密度過大但需要維持細(xì)胞狀態(tài)時,可適當(dāng)增加β-巰基乙醇的比例(不超過標(biāo)準(zhǔn)量的1.5倍)。

【注意事項】

1.該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞。根據(jù)我司培養(yǎng)經(jīng)驗A:當(dāng)培養(yǎng)基顏色比較黃時,建議離心換液,細(xì)胞沉淀用手指彈松后添加完全培養(yǎng)基均勻移入兩個新的 T25培養(yǎng)瓶中維續(xù)培養(yǎng)即可(1:2 傳代)。B:細(xì)胞數(shù)量多,液體不黃,建議使用【半換液法】添加一半新培養(yǎng)基并進行分瓶(1:2傳)。
2. 該細(xì)胞在培養(yǎng)過程中,可能會有少量貼壁或聚集成小團生長,屬于正常情況。傳代時可以輕輕打散,如少許細(xì)胞已貼壁則傳代時丟棄,小團生長的細(xì)胞正常傳代培養(yǎng)即可。
3. 該細(xì)胞對細(xì)胞密度較為敏感,培養(yǎng)、傳代時請注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍。
4.  該細(xì)胞較難復(fù)蘇,復(fù)蘇后需要約7天左右才可能恢復(fù)至正常狀態(tài)。剛復(fù)蘇后,細(xì)胞生長緩慢且會出現(xiàn)黑色細(xì)胞碎片,少量細(xì)胞碎片不影響細(xì)胞正常生長,待細(xì)胞恢復(fù)生長后用半換液法可以稀釋碎片。
5. 細(xì)胞凍存時務(wù)請?zhí)岣呒?xì)胞密度,建議1個T25培養(yǎng)瓶中含有3-5×106細(xì)胞量時凍存一支。
6. 該細(xì)胞對血清質(zhì)量較為敏感,我司建議您使用優(yōu)質(zhì)胎牛血清進行培養(yǎng)或選擇訂購我司配套THP-1完全培養(yǎng)液。

【發(fā)表過的文獻】

截至到2024年,引用中喬新舟該細(xì)胞發(fā)表過的文獻總數(shù)42篇,總的影響因子228.79,最高影響因子33.50.

下面列舉了幾篇代表性的文獻,可以參考:
1.論文題目:Multi-dimensional single-cell characterization revealed suppressive immune microenvironment in AFP-positive hepatocellular carcinoma
期刊: Cell Discovery 影響因子:33.5
2.論文題目:Exosomal ncRNAs profiling of mycobacterial infection identified miRNA-185-5p as a novel biomarker for tuberculosis
期刊:BRIEFINGS IN BIOINFORMATICS 影響因子:11.622
3.論文題目:45S5 Bioglass? works synergistically with siRNA to downregulate the expression of matrix metalloproteinase-9 in diabetic wounds
期刊:Acta Biomaterialia 影響因子:10.633
4.論文題目:Genetically engineered CXCR4-modified exosomes for delivery of miR-126 mimics to macrophages alleviate periodontitis
期刊:JOURNAL OF NANOBIOTECHNOLOGY 影響因子:10.2
5.論文題目:Myeloid cell-expressed MNDA enhances M2 polarization to facilitate the metastasis of hepatocellular carcinoma
期刊:International Journal of Biological Sciences 影響因子:8.2

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