LLC細胞的培養(yǎng)復(fù)蘇和常見問題解答_abio生物試劑品牌網(wǎng)
【細胞介紹】
Lewis肺癌是從C57BL小鼠的肺建立的細胞系，該小鼠帶有由原發(fā)性Lewis肺癌的移植產(chǎn)生的腫瘤。LLC細胞對1, 3-雙-（2-氯乙基）-1-亞硝基脲有抗性，但對甲氨蝶呤敏感。據(jù)報道，LLC細胞具有高度致瘤性，可以在C57BL小鼠成瘤，但在小鼠中轉(zhuǎn)移性較弱。LLC細胞在培養(yǎng)瓶中形成多層，但實際上沒有融合。LLC細胞鼠痘病毒陰性，被廣泛用作轉(zhuǎn)移模型，并有助于研究癌癥化療藥物的機制。
以下是中喬新舟拍攝的LLC細胞拍攝的在不同放大倍數(shù)下的圖片：
4X
10X
20X
細胞名稱：LLC小鼠肺癌細胞
細胞別稱：LL/2 (LLC1); LL/2 (LLc1); LL/2(LLc1); LL/2; LL2; LLC1; LLC; Lewis lung carcinoma line 1; Lewis lung carcinoma; Lewis-Lung; Lewis Lung
產(chǎn)品貨號：ZQ0203
生長特性：半貼半懸
培養(yǎng)條件 ：DMEM高糖（品牌：中喬新舟 貨號：ZQ-100）+10%胎牛血清（中喬新舟 貨號：ZQ0500）+1%雙抗（中喬新舟 貨號：CSP006）
完全培養(yǎng)基貨號：ZM0203
【細胞傳代】
該細胞為半貼壁半懸浮細胞，懸浮細胞是活細胞，可用離心管收集細胞懸液后，于（125g，3～5 分鐘）1000-1200rmp 收集細胞；部分貼壁不牢的細胞可直接吹起使之懸浮；貼壁較牢固的細胞可用 PBS 潤洗后，在培養(yǎng)瓶中加入 1-2 毫升 0.25% 胰蛋白酶溶液（含 EDTA）置于 37℃培養(yǎng)箱中消化，待細胞變圓收縮成流沙狀態(tài)脫落后可用 4-6 mL 左右完全培養(yǎng)基進行終止消化，輕輕吹散細胞后離心搜集細胞；將懸浮的細胞和貼壁的細胞收集到 一起混勻后按比例接種到新的培養(yǎng)瓶。
【細胞凍存】
1.細胞密度 80%以上，活細胞百分率達 95%以上時，將細胞按照以上步驟進行消化收集細胞沉淀進行凍存。
2.細胞沉淀用適量 4°C 凍存液（貨號：CSP042）重懸， 建議一瓶 T25 細胞凍存一管（1ml/管），直接將分裝 好的細胞凍存管置于-80℃超低溫冰箱中過夜，若需液氮長期保存，需先置于-80℃至少一天后方可轉(zhuǎn)至液氮罐中。
NOTE:若不是我司凍存液請按照凍存液說明書操作，若是自配凍存液需梯度降溫凍存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min， -80℃放置一天后轉(zhuǎn)移至液氮保存)或使用程序降溫盒降溫后，再轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
【細胞復(fù)蘇】
1.液氮取出的細胞放入干冰中轉(zhuǎn)移到細胞房，提前準(zhǔn)備好完全培養(yǎng)基，離心管。
2.凍管細胞在 37°C 水浴中迅速解凍（大約 1-2 分鐘）。為了減少污染的可能性，保持凍管瓶蓋在水浴液面之 上。 一旦大部分內(nèi)容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍管外壁。
3.將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到含 3-6mL 完全培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻，離心（125 g，3～5 分鐘）1000-1200rmp 去除培養(yǎng)基， 細胞沉淀用手指彈松，添加 3ml 完全培養(yǎng)基混勻細胞并進行計數(shù)，用適量完全培養(yǎng)基將細胞密度調(diào)整至 0.6-2.0X105，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，于培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。建議 T25 培養(yǎng)瓶添加 5-7ml 完全培養(yǎng)基。當(dāng)密度達 到 80%以上時傳代。
【常見問題】
1.培養(yǎng)過程中細胞碎片較多怎么處理？
1）細胞內(nèi)的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，大部分細胞都會有這種現(xiàn)象，只是不同細胞顆粒多少有區(qū)別，細胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件。
2）細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物，可通過換液去除，因此每2天正常換液即可，換液前培養(yǎng)基充分預(yù)熱。
2.細胞具體消化時間是多久？
每個客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的，不能完全規(guī)定消化時間，以實際消化效果和客戶經(jīng)驗為準(zhǔn)。
【發(fā)表過的文獻】
下面列舉了幾篇代表性的文獻，可以參考：
1.論文題目：B4GALT1 promotes immune escape by regulating the expression of PD-L1 at multiple levels in lung adenocarcinoma.
期刊： JOURNAL OF EXPERIMENTAL & CLINICAL CANCER RESEARCH 影響因子：11.3
2. 論文題目：Ansofaxine suppressed NSCLC progression by increasing sensitization to combination immunotherapy.
期刊：INTERNATIONAL IMMUNOPHARMACOLOGY 影響因子：4.8
3. 論文題目：The combination of a PTP1B inhibitor, TNFR2 blocker, and PD 1 antibody suppresses the progression of non small cell lung cancer tumors by enhancing immunocompetence.
期刊：ONCOLOGY REPORTS 影響因子：3.8
Lewis肺癌是從C57BL小鼠的肺建立的細胞系，該小鼠帶有由原發(fā)性Lewis肺癌的移植產(chǎn)生的腫瘤。LLC細胞對1, 3-雙-（2-氯乙基）-1-亞硝基脲有抗性，但對甲氨蝶呤敏感。據(jù)報道，LLC細胞具有高度致瘤性，可以在C57BL小鼠成瘤，但在小鼠中轉(zhuǎn)移性較弱。LLC細胞在培養(yǎng)瓶中形成多層，但實際上沒有融合。LLC細胞鼠痘病毒陰性，被廣泛用作轉(zhuǎn)移模型，并有助于研究癌癥化療藥物的機制。
以下是中喬新舟拍攝的LLC細胞拍攝的在不同放大倍數(shù)下的圖片：
4X
10X
20X
細胞名稱：LLC小鼠肺癌細胞
細胞別稱：LL/2 (LLC1); LL/2 (LLc1); LL/2(LLc1); LL/2; LL2; LLC1; LLC; Lewis lung carcinoma line 1; Lewis lung carcinoma; Lewis-Lung; Lewis Lung
產(chǎn)品貨號：ZQ0203
生長特性：半貼半懸
培養(yǎng)條件 ：DMEM高糖（品牌：中喬新舟 貨號：ZQ-100）+10%胎牛血清（中喬新舟 貨號：ZQ0500）+1%雙抗（中喬新舟 貨號：CSP006）
完全培養(yǎng)基貨號：ZM0203
【細胞傳代】
該細胞為半貼壁半懸浮細胞，懸浮細胞是活細胞，可用離心管收集細胞懸液后，于（125g，3～5 分鐘）1000-1200rmp 收集細胞；部分貼壁不牢的細胞可直接吹起使之懸浮；貼壁較牢固的細胞可用 PBS 潤洗后，在培養(yǎng)瓶中加入 1-2 毫升 0.25% 胰蛋白酶溶液（含 EDTA）置于 37℃培養(yǎng)箱中消化，待細胞變圓收縮成流沙狀態(tài)脫落后可用 4-6 mL 左右完全培養(yǎng)基進行終止消化，輕輕吹散細胞后離心搜集細胞；將懸浮的細胞和貼壁的細胞收集到 一起混勻后按比例接種到新的培養(yǎng)瓶。
【細胞凍存】
1.細胞密度 80%以上，活細胞百分率達 95%以上時，將細胞按照以上步驟進行消化收集細胞沉淀進行凍存。
2.細胞沉淀用適量 4°C 凍存液（貨號：CSP042）重懸， 建議一瓶 T25 細胞凍存一管（1ml/管），直接將分裝 好的細胞凍存管置于-80℃超低溫冰箱中過夜，若需液氮長期保存，需先置于-80℃至少一天后方可轉(zhuǎn)至液氮罐中。
NOTE:若不是我司凍存液請按照凍存液說明書操作，若是自配凍存液需梯度降溫凍存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min， -80℃放置一天后轉(zhuǎn)移至液氮保存)或使用程序降溫盒降溫后，再轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
【細胞復(fù)蘇】
1.液氮取出的細胞放入干冰中轉(zhuǎn)移到細胞房，提前準(zhǔn)備好完全培養(yǎng)基，離心管。
2.凍管細胞在 37°C 水浴中迅速解凍（大約 1-2 分鐘）。為了減少污染的可能性，保持凍管瓶蓋在水浴液面之 上。 一旦大部分內(nèi)容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍管外壁。
3.將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到含 3-6mL 完全培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻，離心（125 g，3～5 分鐘）1000-1200rmp 去除培養(yǎng)基， 細胞沉淀用手指彈松，添加 3ml 完全培養(yǎng)基混勻細胞并進行計數(shù)，用適量完全培養(yǎng)基將細胞密度調(diào)整至 0.6-2.0X105，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，于培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。建議 T25 培養(yǎng)瓶添加 5-7ml 完全培養(yǎng)基。當(dāng)密度達 到 80%以上時傳代。
【常見問題】
1.培養(yǎng)過程中細胞碎片較多怎么處理？
1）細胞內(nèi)的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，大部分細胞都會有這種現(xiàn)象，只是不同細胞顆粒多少有區(qū)別，細胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件。
2）細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物，可通過換液去除，因此每2天正常換液即可，換液前培養(yǎng)基充分預(yù)熱。
2.細胞具體消化時間是多久？
每個客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的，不能完全規(guī)定消化時間，以實際消化效果和客戶經(jīng)驗為準(zhǔn)。
【發(fā)表過的文獻】
下面列舉了幾篇代表性的文獻，可以參考：
1.論文題目：B4GALT1 promotes immune escape by regulating the expression of PD-L1 at multiple levels in lung adenocarcinoma.
期刊： JOURNAL OF EXPERIMENTAL & CLINICAL CANCER RESEARCH 影響因子：11.3
2. 論文題目：Ansofaxine suppressed NSCLC progression by increasing sensitization to combination immunotherapy.
期刊：INTERNATIONAL IMMUNOPHARMACOLOGY 影響因子：4.8
3. 論文題目：The combination of a PTP1B inhibitor, TNFR2 blocker, and PD 1 antibody suppresses the progression of non small cell lung cancer tumors by enhancing immunocompetence.
期刊：ONCOLOGY REPORTS 影響因子：3.8
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