ArrayJet高通量生物芯片點樣儀助海洋病原微生物快速檢測方法建立_abio生物試劑品牌網
ArrayJet高通量生物芯片點樣儀協助海洋病原微生物快速檢測方法的建立
在我國沿海的甲殼類養殖場，一種稱為 “牛奶病” 的疫病正威脅著養殖戶的生計。該疾病由Hematodinium屬寄生甲藻所引發，專門侵襲三疣梭子蟹、鋸緣青蟹等經濟甲殼類，一旦爆發便會導致宿主器官功能衰竭、大規模死亡，給水產養殖業帶來巨大損失。棘手的是，這種寄生甲藻有著復雜的生命周期，既能以微孢子形式通過水體傳播，又能以滋養體形式在宿主體內大量繁殖。傳統檢測方法主要依賴專業人員對樣本形態進行觀察，操作復雜、靈敏度低，難以實現快速篩查和早期預警。如何精準、高效地捕捉這種“隱形殺手”，成為甲殼類養殖健康發展的關鍵。
文章題目為“Establishment of CARD-FISH and Dot-ELISA Assays for Diagnosis of the Parasitic Dinoflagellate Hematodinium perezi”于2025年6月發表在Journal of Fish Diseases雜志，作者來自于中國科學院海洋研究所海洋生態與環境重點實驗室。
為了有效檢測 Hematodinium的不同生命階段，研究團隊開發了兩種檢測方法 CARD-FISH 和 Dot-ELISA，分別針對其體外微孢子和體內滋養體。
CARD-FISH 檢測方法：將含有大量微孢子的海水用多聚甲醛固定，并過濾到 0.2μm濾膜上，經瓊脂包被、乙醇脫水、HCl處理等步驟制備樣本，隨后使用5'端標記辣根過氧化物酶（HRP）的寡核苷酸探針，在特定的雜交緩沖液中，35℃下雜交 8 小時，清洗后加入混有底物的發光液，用熒光顯微鏡觀察結果，可清晰看到 Hematodinium微孢子的陽性信號。通過測試不同雜交時間，確定4小時為最佳時長；同時對多種藻類、細菌等進行檢測，驗證方法的特異性（如圖 1、2）。
圖1（左）.Hematodinium perezi血液菌小孢子的CARD-FISH檢測。(A)雜交1h， (B)雜交2h， (C)雜交4h， (D)雜交8h.
圖2（右）.CARD-FISH法檢測特異性。(A) H. perezi小孢子，(B) 5種藻類（Prorocentrum minimum, P. micans, Alexandrium sp., Heterosigma akashiwo and Akashiwo sanguinea）的細胞樣本，(C) 2種弧菌（副溶血性弧菌、harveyi弧菌）的細菌樣本和(D)肝原腸胞蟲的細菌樣本.
Dot-ELISA 檢測方法：識別宿主體內的滋養體，采用放射免疫沉淀法提取 Hematodinium寄生蟲蛋白，與高通量抗體芯片孵育篩選特異性單克隆抗體，芯片由 英國ArrayJet公司的Marathon（現Mecury系列）生物芯片點樣儀制備，大約80, 000種單克隆抗體被點印在硝酸纖維素膜上，最終獲得了能特異性識別 Hematodinium 滋養體的單克隆抗體HD6944。實驗通過觀察是否出現藍紫色斑點判斷是否感染，通過測試不同稀釋比例的單克隆抗體，確定 1:2000為最佳稀釋濃度；并對多種病原體進行檢測，驗證了方法的特異性（圖3、4）。
圖3（左）.單抗（HD6944）的最佳濃度用于Dot ELISA血液病檢測。(A)健康的血淋巴；(B)輕度血液病感染的血淋巴，(C)重度血液病感染的血淋巴（陽性對照），(D)無菌ddH2O（空白對照）.
圖4（右）.Dot-ELISA法的特異性驗證。(A)健康血淋巴，(B)白斑綜合征病毒，(C)感染性皮下和造血壞死病毒，(D)副溶血性弧菌，(E)哈維氏弧菌，(F)肝原腸胞蟲，(G)血細胞滋養體，(H)無菌ddH2O（空白對照），(I)Prorocentrum minimum, (J) Prorocentrum micans, (K) Alexandrium sp., (L) akashiwo Heterosigma akashiwo sanguinea.
該研究成功建立的 CARD-FISH 和 Dot-ELISA 兩種檢測方法，填補了 Hematodinium不同生命階段檢測技術的空白。CARD-FISH可有效監測水體中的微孢子，為阻斷傳播路徑提供了依據；Dot-ELISA 操作簡便、結果直觀，適合在養殖場等現場快速檢測，能及時發現感染個體，有助于早期防控。同時為 Hematodinium 疫情的預防和控制提供了強有力的技術支持，有助于減少甲殼類養殖產業的經濟損失，保障產業的健康可持續發展，對我國沿海地區的水產養殖具有重要的現實意義。
原文鏈接： https://doi.org/10.1111/jfd.70007
Arrayjet位于英國愛丁堡，專注于提供生物芯片應用領域的解決方案及服務。自2000年公司成立即致力于開發新型生物樣品噴點方案–噴墨式液體處理平臺，該系統于2006年上市，目前用戶遍布全球27個國家。
Mercury系列產品采用獨特的飛行噴墨點樣技術實現行業第一的快速、非接觸式微量液體處理。同時上萬種不同樣品可以進行快速點樣，專利的上樣模塊配合高通量的點樣噴頭保障您的點樣操作快速、無污染，更低的上樣體積可有效減少樣品損失，使您的珍貴樣品物盡其用。該系列產品制備高密度的蛋白微陣列芯片、抗體微陣列芯片、糖微陣列芯片、小分子化合物微陣列芯片等，用于自身免疫抗體、生物標記物、候選疫苗或靶點的高通量篩選，疾病研究和新藥研發等諸多科研和臨床領域。
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環亞生物科技有限公司
地址：上海市松江區莘磚公路518號9幢502室
電話：021-54583565
郵箱： info@apgbio.com
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在我國沿海的甲殼類養殖場，一種稱為 “牛奶病” 的疫病正威脅著養殖戶的生計。該疾病由Hematodinium屬寄生甲藻所引發，專門侵襲三疣梭子蟹、鋸緣青蟹等經濟甲殼類，一旦爆發便會導致宿主器官功能衰竭、大規模死亡，給水產養殖業帶來巨大損失。棘手的是，這種寄生甲藻有著復雜的生命周期，既能以微孢子形式通過水體傳播，又能以滋養體形式在宿主體內大量繁殖。傳統檢測方法主要依賴專業人員對樣本形態進行觀察，操作復雜、靈敏度低，難以實現快速篩查和早期預警。如何精準、高效地捕捉這種“隱形殺手”，成為甲殼類養殖健康發展的關鍵。
文章題目為“Establishment of CARD-FISH and Dot-ELISA Assays for Diagnosis of the Parasitic Dinoflagellate Hematodinium perezi”于2025年6月發表在Journal of Fish Diseases雜志，作者來自于中國科學院海洋研究所海洋生態與環境重點實驗室。
為了有效檢測 Hematodinium的不同生命階段，研究團隊開發了兩種檢測方法 CARD-FISH 和 Dot-ELISA，分別針對其體外微孢子和體內滋養體。
CARD-FISH 檢測方法：將含有大量微孢子的海水用多聚甲醛固定，并過濾到 0.2μm濾膜上，經瓊脂包被、乙醇脫水、HCl處理等步驟制備樣本，隨后使用5'端標記辣根過氧化物酶（HRP）的寡核苷酸探針，在特定的雜交緩沖液中，35℃下雜交 8 小時，清洗后加入混有底物的發光液，用熒光顯微鏡觀察結果，可清晰看到 Hematodinium微孢子的陽性信號。通過測試不同雜交時間，確定4小時為最佳時長；同時對多種藻類、細菌等進行檢測，驗證方法的特異性（如圖 1、2）。
圖1（左）.Hematodinium perezi血液菌小孢子的CARD-FISH檢測。(A)雜交1h， (B)雜交2h， (C)雜交4h， (D)雜交8h.
圖2（右）.CARD-FISH法檢測特異性。(A) H. perezi小孢子，(B) 5種藻類（Prorocentrum minimum, P. micans, Alexandrium sp., Heterosigma akashiwo and Akashiwo sanguinea）的細胞樣本，(C) 2種弧菌（副溶血性弧菌、harveyi弧菌）的細菌樣本和(D)肝原腸胞蟲的細菌樣本.
Dot-ELISA 檢測方法：識別宿主體內的滋養體，采用放射免疫沉淀法提取 Hematodinium寄生蟲蛋白，與高通量抗體芯片孵育篩選特異性單克隆抗體，芯片由 英國ArrayJet公司的Marathon（現Mecury系列）生物芯片點樣儀制備，大約80, 000種單克隆抗體被點印在硝酸纖維素膜上，最終獲得了能特異性識別 Hematodinium 滋養體的單克隆抗體HD6944。實驗通過觀察是否出現藍紫色斑點判斷是否感染，通過測試不同稀釋比例的單克隆抗體，確定 1:2000為最佳稀釋濃度；并對多種病原體進行檢測，驗證了方法的特異性（圖3、4）。
圖3（左）.單抗（HD6944）的最佳濃度用于Dot ELISA血液病檢測。(A)健康的血淋巴；(B)輕度血液病感染的血淋巴，(C)重度血液病感染的血淋巴（陽性對照），(D)無菌ddH2O（空白對照）.
圖4（右）.Dot-ELISA法的特異性驗證。(A)健康血淋巴，(B)白斑綜合征病毒，(C)感染性皮下和造血壞死病毒，(D)副溶血性弧菌，(E)哈維氏弧菌，(F)肝原腸胞蟲，(G)血細胞滋養體，(H)無菌ddH2O（空白對照），(I)Prorocentrum minimum, (J) Prorocentrum micans, (K) Alexandrium sp., (L) akashiwo Heterosigma akashiwo sanguinea.
該研究成功建立的 CARD-FISH 和 Dot-ELISA 兩種檢測方法，填補了 Hematodinium不同生命階段檢測技術的空白。CARD-FISH可有效監測水體中的微孢子，為阻斷傳播路徑提供了依據；Dot-ELISA 操作簡便、結果直觀，適合在養殖場等現場快速檢測，能及時發現感染個體，有助于早期防控。同時為 Hematodinium 疫情的預防和控制提供了強有力的技術支持，有助于減少甲殼類養殖產業的經濟損失，保障產業的健康可持續發展，對我國沿海地區的水產養殖具有重要的現實意義。
原文鏈接： https://doi.org/10.1111/jfd.70007
Arrayjet位于英國愛丁堡，專注于提供生物芯片應用領域的解決方案及服務。自2000年公司成立即致力于開發新型生物樣品噴點方案–噴墨式液體處理平臺，該系統于2006年上市，目前用戶遍布全球27個國家。
Mercury系列產品采用獨特的飛行噴墨點樣技術實現行業第一的快速、非接觸式微量液體處理。同時上萬種不同樣品可以進行快速點樣，專利的上樣模塊配合高通量的點樣噴頭保障您的點樣操作快速、無污染，更低的上樣體積可有效減少樣品損失，使您的珍貴樣品物盡其用。該系列產品制備高密度的蛋白微陣列芯片、抗體微陣列芯片、糖微陣列芯片、小分子化合物微陣列芯片等，用于自身免疫抗體、生物標記物、候選疫苗或靶點的高通量篩選，疾病研究和新藥研發等諸多科研和臨床領域。
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