EGF &; TGF使用指南

生長(zhǎng)因子
解鎖實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵開(kāi)關(guān)！
在微觀的細(xì)胞王國(guó)里，
沒(méi)有電話，沒(méi)有微信，
細(xì)胞們?nèi)绾尉珳?zhǔn)調(diào)控自己的命運(yùn)？
何時(shí)分裂增殖？何時(shí)分化成熟？何時(shí)遷移修復(fù)？何時(shí)功成身退？

答案就藏在那些被稱為“生長(zhǎng)因子”的蛋白質(zhì)小分子中！它們?nèi)缤?xì)胞間的摩斯密碼，傳遞著至關(guān)重要的生命指令。今天，我們聚焦兩位“明星信使”：EGF（表皮生長(zhǎng)因子）和TGF（轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子），揭秘它們的功能奧秘與實(shí)驗(yàn)應(yīng)用技巧！

01 認(rèn)識(shí)EGF與TGF家族
EGF (EPIdermal Growth Factor) 表皮生長(zhǎng)因子
  身份 ： 
最早被發(fā)現(xiàn)、研究最廣泛的生長(zhǎng)因子之一，屬于EGF家族（包含HB-EGF, TGF-α等）。
 核心使命 ：
強(qiáng)力促進(jìn)細(xì)胞增殖！
靶細(xì)胞： 
廣泛作用于上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、多種干細(xì)胞等。
關(guān)鍵作用：

• 刺激細(xì)胞分裂與增殖： 加速傷口愈合、組織修復(fù)。
• 促進(jìn)細(xì)胞遷移： 在胚胎發(fā)育、傷口愈合中起關(guān)鍵作用。
• 抑制細(xì)胞凋亡： 維持細(xì)胞存活。
• 參與發(fā)育分化： 影響特定組織器官的形成。

 信號(hào)通路： 
結(jié)合細(xì)胞膜上的EGFR（表皮生長(zhǎng)因子受體） → 觸發(fā)受體二聚化及自磷酸化 → 激活下游RAS-RAF-MEK-ERK (MAPK通路) 和 PI3K-AKT-mTOR通路 → 促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程（G1到S期）及生存。

02  TGF (Transforming Growth Factor) 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子
身份： 
一個(gè)龐大的超家族，成員眾多，功能復(fù)雜多樣，甚至相反！最核心、研究最深入的是 TGF-β亞家族 (包括TGF-β1, β2, β3, Activins, Nodal, BMPs等)。
  核心使命：
  高度環(huán)境依賴，功能“雙面刃”！
靶細(xì)胞： 幾乎影響所有細(xì)胞類型。
關(guān)鍵作用 (以TGF-β1為代表)：

• 抑制增殖： 對(duì)大多數(shù)上皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞是強(qiáng)效的生長(zhǎng)抑制劑（使細(xì)胞停滯在G1期）。
• 促進(jìn)分化： 誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞分化；參與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），這在胚胎發(fā)育、傷口愈合（早期）、但也與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)。
• 刺激細(xì)胞外基質(zhì)合成： 促進(jìn)膠原等ECM蛋白產(chǎn)生，對(duì)組織纖維化至關(guān)重要（過(guò)度則導(dǎo)致病理性纖維化）。
• 免疫調(diào)節(jié)： 主要發(fā)揮免疫抑制作用，調(diào)節(jié)T細(xì)胞分化，維持免疫耐受。
• 促進(jìn)凋亡： 在某些情況下誘導(dǎo)特定細(xì)胞死亡。

信號(hào)通路：
結(jié)合細(xì)胞膜上的II型受體 → 招募并磷酸化I型受體 → 激活受體調(diào)節(jié)的Smad蛋白 (R-Smads：Smad2/3 for TGF-β/Activin/Nodal, Smad1/5/8 for BMPs) → R-Smads與Co-Smad (Smad4) 形成復(fù)合物入核 → 調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄。非Smad通路（如MAPK, PI3K）也參與復(fù)雜調(diào)控。

02  如何正確使用這些“魔法因子”？

關(guān)鍵操作要點(diǎn)：步步為營(yíng)

01儲(chǔ)存與復(fù)溶
 嚴(yán)格按說(shuō)明書操作！ 通常是凍干粉或高濃度溶液保存在-20°C或-80°C。
 復(fù)溶時(shí)使用無(wú)菌、無(wú)內(nèi)毒素的溶劑（通常是含載體蛋白如BSA的緩沖液或培養(yǎng)用基礎(chǔ)液）。避免反復(fù)凍融！
 復(fù)溶后根據(jù)使用頻率分裝，儲(chǔ)存于-20°C或-80°C。工作液可在4°C短期存放（1-2周，依說(shuō)明書）。

02工作濃度：黃金法則！
濃度范圍差異巨大！ 切忌經(jīng)驗(yàn)主義！
必查文獻(xiàn)！ 參考你所研究特定細(xì)胞類型的相關(guān)文獻(xiàn)中使用的濃度。
必看說(shuō)明書！ 商品化因子會(huì)提供建議濃度范圍。
典型參考范圍 (需驗(yàn)證！)：

• EGF: 常用 1 - 100 ng/mL (如原代角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)常加10-20 ng/mL)。
• TGF-β1: 常用 0.1 - 20 ng/mL。濃度過(guò)低可能無(wú)效，過(guò)高可能誘導(dǎo)非預(yù)期效應(yīng)（如強(qiáng)EMT或過(guò)度纖維化）。1-5 ng/mL 常用于抑制增殖或誘導(dǎo)輕度EMT。
• 進(jìn)行濃度梯度預(yù)實(shí)驗(yàn)： 對(duì)于新細(xì)胞或關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)，務(wù)必設(shè)置不同濃度梯度（如0, 0.1, 1, 5, 10, 20 ng/mL），找到最優(yōu)效果且無(wú)細(xì)胞毒性的濃度。

03添加方式
  直接加入培養(yǎng)基： 最常見(jiàn)方式。在無(wú)菌操作下，將計(jì)算好體積的生長(zhǎng)因子溶液輕柔加入完全培養(yǎng)基中，充分混勻。
更換含因子培養(yǎng)基： 在需要精確控制作用時(shí)間或去除舊因子影響時(shí)（如誘導(dǎo)分化），吸掉舊培養(yǎng)基，加入新配制的含因子培養(yǎng)基。

04作用時(shí)間
EGF: 促進(jìn)增殖通常需要持續(xù)暴露（每次換液都需添加）。
TGF-β: 其效應(yīng)可能是時(shí)間依賴性的：

• 短期處理（幾小時(shí)到幾天）：可能快速激活信號(hào)（如磷酸化Smad2/3），誘導(dǎo)部分基因表達(dá)。
• 長(zhǎng)期處理（數(shù)天到數(shù)周）：才能觀察到明顯的表型變化（如生長(zhǎng)抑制、EMT、基質(zhì)沉積、分化標(biāo)志物表達(dá)）。需根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)計(jì)處理時(shí)長(zhǎng)。