2013 年細(xì)胞囊泡運輸調(diào)節(jié)機(jī)制獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)或生理獎，外泌體也成為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點。 外囊泡Extracellular Vesicles (EVs)廣泛存在原核及真核細(xì)胞中，EVs大致可分為Ectosomes和Exosomes。Ectosomes是通過向外出芽夾在質(zhì)膜表面的囊泡，包括微囊泡、微粒和直徑約為50 nm～1 mm的大囊泡。Exosomes是40至160 nm（平均約100 nm）的EV，具有內(nèi)泌體來源。 外泌體包含DNA、RNA、脂質(zhì)、代謝物以及胞質(zhì)和細(xì)胞表面蛋白等。 其產(chǎn)生主要原因可能從細(xì)胞中清除過量和/或不必要的成分，以維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)。
 
圖1：外泌體的形成及分類 外泌體與腫瘤免疫，神經(jīng)退行性疾病，心血管疾病等進(jìn)展有關(guān)，調(diào)節(jié)復(fù)雜的細(xì)胞通路內(nèi)在特性并推進(jìn)在疾病治療控制中潛在效果。
 
外泌體被改造成遞送不同的治療有效負(fù)荷，包括短干擾RNA、反義寡核苷酸、化療藥物和免疫球蛋白。 外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可影響其藥代動力學(xué)特性 ，其天然成分可能在增強(qiáng)生物利用度和最小化不良反應(yīng)中發(fā)揮作用。除了具有治療潛力，在診斷檢測中也有應(yīng)用， 基于外泌體的液體活檢突出了其在診斷和確定癌癥和其他疾病患者預(yù)后方面的潛在效用 ，疾病進(jìn)展和治療反應(yīng)也可以通過外泌體的多組分分析來確定。  
  如何來提取及檢測外泌體？
  外泌體的分離方法通常包括密度梯度離心、 差速離心 、體積排阻、免疫分離等方法
外泌體檢測目前沒有單一的方法能夠完全滿足 EV 表征的所有要求。為了全面表征 EV，建議提供三組數(shù)據(jù)：（1）濃度和粒徑分布；（2）形態(tài)分析；（3） 蛋白質(zhì)組成分析（如蛋白質(zhì)免疫印跡法）。常用的 外泌體標(biāo)志蛋白 包括 CD9 、 CD81 、 TSG101, Alix ， Flotillin-1 ， HSP70 等 。此外，還應(yīng)包括總蛋白質(zhì)和總 RNA 等質(zhì)量控制數(shù)據(jù)，以支持下游的組學(xué)分析。
  圖2. 外泌體的表征及功能
 
     默克在外泌體研究領(lǐng)域有完整解決方案，
涵蓋從前期樣本處理，
外泌體提取及外泌體檢測全流程
 
1 ． 樣本前處理
  微濾： 0.22μm 過濾器對細(xì)胞上清液過濾以去除一些微囊泡（100-1000nm）和額外的死細(xì)胞碎片（0.1-10μm）。
產(chǎn)品組推薦：
  PES 無菌針式濾器（綠色）  代表貨號 SLGPR33RB  

• 過濾速度最快提速50%
• 納污能力強(qiáng)，拒絕堵塞
• 低溶出，低蛋白吸附

    PVDF 無菌針式濾器（黃色）代表貨號 SLHVR33RB  

• 低蛋白吸附濾器代表
• 含蛋白成分溶液過濾最優(yōu)選
• 水溶液及溫和有機(jī)樣品過濾

   2 ． 外泌體提取
  超濾富集細(xì)胞外囊泡：使用Amicon ^?  Ultra 100 kDa 截留分子量過濾器超濾離心，再做樣本收集。
超濾管產(chǎn)品組推薦：
  Amicon^? Ultra 100 kDa 超濾管， Millipore , UFC9100
Amicon^? Ultra 3 kDa 超濾管， Millipore, UFC9003
 

• 高回收率，樣本損失少：Ultracel^? 再生纖維素超濾膜，截留精準(zhǔn)，低吸附，>90% 回收率
• 不易堵塞，更快過濾：雙側(cè)豎膜切向流設(shè)計，最少僅需10分鐘
• 熱封技術(shù)，避免污染：不使用粘合劑，防止溶出物污染影響后續(xù)分析結(jié)果
• 性能穩(wěn)定，數(shù)據(jù)可靠：一體化設(shè)計，合理死體積，數(shù)據(jù)平行性、重現(xiàn)性好

    3 ． 外泌體檢測 （ WB 檢測）
  ZooMAb ^? 重組抗體對外泌體常見標(biāo)志物進(jìn)行檢測，更精準(zhǔn)表征。
  產(chǎn)品組推薦： ZooMAb^? 重組單克隆抗體  

• 高特異性及批間一致性：HEK293 細(xì)胞中重組表達(dá)，不含抑菌劑或動物來源的防腐劑（如BSA），用于體內(nèi)和體外應(yīng)用。
• 3種以上應(yīng)用驗證:  多重篩選獲得高親和力、高特異性的克隆，每種抗體經(jīng)過3 種以上應(yīng)用驗證，如WB，IHC，IF，ELSIA 等，一支抗體解決多種應(yīng)用需求。
• 工藝升級：獨特的凍干粉形式，儲存更便捷。提供25 UL 或4x25 UL 包裝，無需再分裝或反復(fù)凍融。

  表1： 從ExPI293上清液中提取的細(xì)胞外囊泡蛋白質(zhì)標(biāo)志物的WB結(jié)果
  備注：MERCK生物應(yīng)用開發(fā)培訓(xùn)實驗室內(nèi)部檢測數(shù)據(jù)，僅供參考，默克對數(shù)據(jù)有最終解釋權(quán)

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