隨著科學家們對復雜生物學問題的不斷探索，對于基因密碼的解碼也需要使用更多強大的組學測序工具來進行更深入的研究。PacBio HiFi測序技術通過高精度長讀長解決了二代短讀長無法突破的重復區(qū)域和大型結(jié)構變異的檢測以及復雜區(qū)域的組裝，還可同步進行表觀遺傳分析，顯著推動了基因組學在精準醫(yī)學、功能基因組學和進化生物學等領域的突破性進展，是解析生命復雜性的重要基石。

                              

 
HiFi 測序性能優(yōu)勢

01.長讀長
Long reads

HiFi測序提供15,000-20,000個堿基對或更長的讀長，使研究者能夠更容易地組裝完整的基因組和測序全長RNA轉(zhuǎn)錄本。

02.單分子分辨率的高準確性
Single-molecule resolution high accuracy

由于PacBio的非系統(tǒng)誤差特性，HiFi測序的單分子準確率可達99.9%（Q30）。
 
03.均一的基因組覆蓋率
Uniform genome coverage   

通過消除PCR擴增偏好性，HiFi測序使研究者能夠分析其他技術通常難以獲取的基因組區(qū)域（如難以測序的GC富集區(qū)域、高度重復區(qū)域、長同源聚合物和回文序列）。

04.表觀遺傳同步檢測
Simultaneous ePIgenetic detection

可以直接通過酶動力學分析在測序過程中同時檢測DNA堿基修飾來提供表觀基因組數(shù)據(jù)而不需要任何額外的復雜樣品制備步驟，支持CpG的5mC檢測和Fiber-seq應用的6mA檢測。

 
HiFi 測序技術原理流程

                            

 
HiFi 測序是由 PacBio公司開發(fā)的一種單分子、長讀長度的測序技術，HiFi 測序開始時，懸浮在溶液中的樣品DNA文庫片段涌入被稱為SMRT（Single Molecule Real-Time，單分子實時）芯片的納米微流控芯片表面。這種芯片的表面上覆蓋著幾百萬個納米級直徑的小孔，稱為ZMW（Zero-Mode Waveguide，零模波導孔），樣品流過SMRT測序芯片時，DNA文庫被固定在ZMW孔的底部，之后加入游離核苷酸，附著在樣品DNA上的DNA聚合酶開始復制DNA分子，當聚合酶將新的核苷酸堿基聚合到新復制的鏈中時，會釋放出微小的光，被光學檢測系統(tǒng)捕獲。根據(jù)發(fā)射的光，測序系統(tǒng)可以確定哪種DNA堿基被合成了。

                          

 
HiFi測序中的DNA聚合酶環(huán)繞樣品DNA分子工作多次，在ZMW孔中產(chǎn)生了DNA分子的多個副本，因此PacBio長讀長測序系統(tǒng)可以通過交叉參照每個分子的副本來準確確定樣品DNA的正確序列，從而最大程度地提高準確性，這種模式稱為CCS測序（Circular Consensus Sequencing，循環(huán)一致性）模式，最終產(chǎn)生高質(zhì)量的HiFi reads。
 

HiFi 測序應用
 
 

 
Vega桌面式測序儀

 
近日推出的PacBio首款桌面式長讀長測序平臺Vega 采用 HiFi 技術，提供出色的數(shù)據(jù)準確性和快速的運行時間，將 PacBio的高通量長讀長測序儀Revio系統(tǒng)的創(chuàng)新技術，以臺式解決方案重新呈現(xiàn)，與HiFi文庫制備流程和SMRT Link運行管理軟件無縫集成，每次運行均可在儀器上進行初級分析，包括DeepConsensus、甲基化檢測和barcode拆分。
 

兩種試劑耗材，輕松使用

                  

 
Vega SMRT Cell 是 HiFi測序的核心，由半導體元件驅(qū)動，能夠提供單分子實時測序。Vega測序板承載上機所需樣品和試劑。一鍵式運行設置將Vega測序板與SMRT Link運行設計連接起來，直觀的設計和觸覺確認降低了錯誤率并簡化了獲取結(jié)果所需的步驟。

 
Vega應用樣本通量 
 

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