方案摘要：通過(guò)自動(dòng)化精準(zhǔn)控制培養(yǎng)基的特異性成分、滅菌條件和分裝精度，結(jié)合酶底物熒光技術(shù)或選擇性培養(yǎng)原理，實(shí)現(xiàn)從 “樣本接種 - 培養(yǎng) - 結(jié)果判讀” 的全流程標(biāo)準(zhǔn)化。其核心價(jià)值在于利用設(shè)備的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，突破傳統(tǒng)手工操作的誤差瓶頸，為飲用水中埃希氏菌的快速、準(zhǔn)確檢測(cè)提供可靠支撐，助力保障飲用水微生物安全。
 
方案詳情：
實(shí)驗(yàn)原理基于總大腸菌群多管發(fā)酵法，當(dāng)初發(fā)酵培養(yǎng)物呈陽(yáng)性時(shí)，取菌液接種于含 β- 葡萄糖醛酸酶特異性熒光底物的培養(yǎng)基。由于大腸埃希氏菌可分泌β- 葡萄糖醛酸酶，該酶能催化熒光底物發(fā)生水解反應(yīng)，生成具熒光活性的產(chǎn)物。通過(guò)紫外激發(fā)熒光檢測(cè)技術(shù)，觀察培養(yǎng)物是否產(chǎn)生特征性熒光，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)水中大腸埃希氏菌的定性檢測(cè)。此方法利用目標(biāo)菌的酶活性差異，將總大腸菌群的初篩與埃希氏菌的特異性鑒別相結(jié)合。
 
二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、培養(yǎng)基和試劑
① EC-MUG培養(yǎng)基
 
2、儀器與設(shè)備
① 紫外燈：6W，波長(zhǎng)為366nm。
② 培養(yǎng)箱。
③ 電子天平。
④ 平皿：直徑9CM。
⑤ 無(wú)菌試管：約15MM×160MM。
⑥ 錐形瓶：1000ML。
⑦ 小倒管。
⑧ 接種環(huán)。
⑨ RAYPA培養(yǎng)基自動(dòng)制備分裝儀。
 
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、接種：使用RAYPA培養(yǎng)基自動(dòng)制備分裝儀，通過(guò)自動(dòng)制備、高壓滅菌及自動(dòng)分裝功能，將EC-MUG培養(yǎng)基分裝至試管中，然后用無(wú)菌接種環(huán)貨無(wú)菌棉簽將總大腸菌群多管發(fā)酵法在初發(fā)酵時(shí)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的試管中液體接種到EC-MUG管中。實(shí)驗(yàn)室生物安全要求應(yīng)依據(jù)GB 19489。
 
2、培養(yǎng)：將已接種的EC-MUG管在培養(yǎng)箱中44.5℃±0.5℃培養(yǎng)24h±2h。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理    將培養(yǎng)后的EC-MUG管在暗處用紫外燈照射，如果有藍(lán)色熒光產(chǎn)生則表示水樣中含有大腸埃希氏菌。
   計(jì)算EC-MUG陽(yáng)性的管數(shù)，查對(duì)應(yīng)的MPN表得出大腸埃希氏菌的MPN值，結(jié)果以MPN/100ML報(bào)告。