細(xì)胞生物學(xué)研究中，細(xì)胞活性檢測(cè)是基礎(chǔ)且關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)。然而，傳統(tǒng)方法在檢測(cè)活細(xì)胞和死細(xì)胞時(shí)常常面臨諸多挑戰(zhàn)：例如，檢測(cè)過程復(fù)雜、耗時(shí)，容易受到細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)條件的限制；熒光信號(hào)不穩(wěn)定，難以準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞；或者需要昂貴的設(shè)備支持，增加了實(shí)驗(yàn)成本。這些問題不僅影響實(shí)驗(yàn)效率，還可能導(dǎo)致結(jié)果偏差，給科研人員帶來諸多困擾。AbMole的Calcein-AM/PI活死細(xì)胞雙染試劑盒（AbMole，M55257），專為解決這些痛點(diǎn)而設(shè)計(jì)，它的檢測(cè)原理基于兩種熒光染料：Calcein-AM和碘化丙啶（PI），能夠快速、準(zhǔn)確地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞，為細(xì)胞活性檢測(cè)提供了一種高效、便捷且可靠的解決方案。AbMole為全球科研客戶提供高純度、高生物活性的抑制劑、細(xì)胞因子、人源單抗、天然產(chǎn)物、熒光染料、多肽、靶點(diǎn)蛋白、化合物庫(kù)、抗生素等科研試劑，全球大量文獻(xiàn)專利引用。   檢測(cè)原理  Calcein-AM/PI活死細(xì)胞雙染試劑盒（AbMole，M55257）內(nèi)含有Calcein-AM和Propidium Iodide（PI，碘化丙啶），Calcein AM 是在傳統(tǒng)的鈣黃綠素（Calcein）上添加了乙酰甲氧基甲酯即（AM）基團(tuán)，導(dǎo)致其具有較強(qiáng)的疏水性，因此容易穿過細(xì)胞膜進(jìn)入胞內(nèi)。Calcein AM本身無熒光，在進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞中內(nèi)源性酯酶水解，生成具有強(qiáng)負(fù)電荷且不能通過細(xì)胞膜的極性分子Calcein并滯留在細(xì)胞內(nèi)，而Calcein可發(fā)出強(qiáng)綠色熒光（Ex/Em= 494nm/517nm）[1]。由于死細(xì)胞缺乏上酯酶，不能或很少能產(chǎn)生Calcein，因此僅活細(xì)胞會(huì)被染色為強(qiáng)綠色熒光，死細(xì)胞不能被染色。PI則是一種無法透過活細(xì)胞膜的染料，由于死細(xì)胞的細(xì)胞膜選擇透過性喪失，PI可以進(jìn)入胞內(nèi)與雙鏈DNA特異性結(jié)合產(chǎn)生強(qiáng)烈的紅色熒光（Ex/Em=535nm/617nm），從而對(duì)死細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記[2]。因此，上述兩種染料的聯(lián)合使用，可以對(duì)活細(xì)胞與死細(xì)胞同時(shí)進(jìn)行雙重?zé)晒馊旧糜趯?shí)驗(yàn)中細(xì)胞活性或細(xì)胞毒性的檢測(cè)。用490nm激發(fā)時(shí)可用熒光顯微鏡同時(shí)觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞；而用545nm激發(fā)時(shí)僅可觀察到死細(xì)胞。2014年，AbMole的兩款抑制劑分別被西班牙國(guó)家心血管研究中心和美國(guó)哥倫比亞大學(xué)用于動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，相關(guān)科研成果發(fā)表于頂刊 Nature 和 Nature Medicine。 圖1. 活死細(xì)胞染色試劑盒的檢測(cè)原理   優(yōu)勢(shì)  AbMole的Calcein-AM/PI活死細(xì)胞雙染試劑盒（AbMole，M55257）具有多種優(yōu)勢(shì)，主要包括以下幾點(diǎn)：

• 1.快速檢測(cè)：操作簡(jiǎn)單，染色過程僅需40分鐘左右，無需復(fù)雜的前處理步驟，大大節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
• 2.高靈敏度：Calcein-AM和PI的熒光信號(hào)清晰明亮，能夠準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞，即使在細(xì)胞密度較低的情況下也能獲得可靠的檢測(cè)結(jié)果。
• 3.廣泛適用性：適用于多種細(xì)胞類型，包括貼壁細(xì)胞、消化后的懸浮細(xì)胞以及原代細(xì)胞，不受細(xì)胞種類限制。對(duì)設(shè)備要求較低，普通熒光顯微鏡或者使用酶標(biāo)儀即可完成檢測(cè)，降低了實(shí)驗(yàn)成本。
• 4.穩(wěn)定可靠：試劑穩(wěn)定性高，熒光信號(hào)持久，不易淬滅，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有重復(fù)性和可靠性。

  范例詳解  研究者們開發(fā)了一種無載體的“特洛伊木馬”直徑可變金屬-有機(jī)納米診療劑，通過配位驅(qū)動(dòng)的超分子順序共組裝抗腫瘤抑制劑PEM、過渡金屬離子（FeIII）和血管生成抑制劑假辣木酸B（PAB）。該納米制劑可有效抑制腫瘤血管的生成。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，科研人員使用了由AbMole提供的Calcein-AM/PI活死細(xì)胞雙染試劑盒（AbMole，M55257）檢測(cè)HeLa、HTdMEC 和 HUVEC 細(xì)胞的細(xì)胞活力[3]。 圖2. Fluorescence images of live/dead stAIning assay of HeLa and HTdMEC cells cultured with different formulations[3].   AbMole是ChemBridge中國(guó)區(qū)官方指定合作伙伴。     參考文獻(xiàn)及鳴謝 [1] HOLLó Z, HOMOLYA L, DAVIS C W, et al. Calcein accumulation as a fluorometric functional assay of the multidrug transporter [J]. Biochimica et biophysica acta, 1994, 1191(2): 384-8. [2] NICOLETTI I, MIGLIORATI G, PAGLIACCI M C, et al. A rapid and simple method for measuring thymocyte apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry [J]. Journal of immunological methods, 1991, 139(2): 271-9. [3] FAN Z, SHI D, ZUO W, et al. Trojan-Horse Diameter-Reducible Nanotheranostics for Macroscopic/Microscopic Imaging-Monitored Chemo-Antiangiogenic Therapy [J]. ACS applied materials & interfaces, 2022, 14(4): 5033-52.