純化案例解析：帶狀皰疹疫苗純化工藝_abio生物試劑品牌網
帶狀皰疹（Herpes Zoster, HZ）是由潛伏在脊髓背根或顱神經節內的水痘-帶狀皰疹病毒（Varicella-Zoster Virus, VZV）經再激活后所致的急性感染性皮膚疾病。水痘-帶狀皰疹病毒又稱人類皰疹病毒3型（HHV-3），為雙鏈DNA病毒，長度約 125 kb，在所有已知的皰疹病毒中最小。
目前尚無治療VZV感染的特效藥物，接種疫苗是一種有效的主動免疫防控策略。從2006年開始，數種水痘-帶狀皰疹疫苗被各國逐漸批準，用于預防帶狀皰疹及其并發癥的發生。
帶狀皰疹下游純化工藝解決方案? 減毒疫苗：
? 重組蛋白疫苗：
博格隆重組帶狀皰疹疫苗純化案例
博格隆已為多種類型重組帶狀皰疹的下游純化提供解決方案，包括純化工藝和層析介質。
本文所展示的案例采用“復合模式層析+疏水層析+陰離子層析+復合模式層析”的四步層析法，最終滿足質量要求——四步層析后樣品SEC純度大于97 %，HCP殘留小于300 ppm（Cygnus試劑盒檢測）。
與傳統純化方案相比，四步層析法去掉了分子篩的步驟，完成重組帶狀皰疹的下游純化工藝過程。
1. 捕獲階段第一步捕獲階段使用了復合模式層析填料。復合模式層析填料結合了不同類型的相互作用，如離子相互作用、氫鍵作用和疏水相互作用。使用該類型填料純化后的樣品純度通常可大于90 %。
此外，復合模式離子交換填料對鹽離子具有一定的耐受性，一般樣品中含有不高于30 mS/cm鹽不會影響其吸附，因此可以相應降低樣品的稀釋比例，從而減少工藝時間和成本。
捕獲階段主要去除了大量雜質并降低了HCP含量。本案例在該階段使用了Diamond MIX-A填料純化某重組帶狀皰疹疫苗。
? 填料：Diamond MIX-A
? 樣品：某重組帶狀皰疹疫苗發酵液上清
? 層析柱規格/柱高：BXK 16/20，柱高10 cm
Fig.1 Diamond MIX-A純化某重組帶狀皰疹疫苗層析圖譜（左）和SDS-PAGE結果（右）
? 純化結果：SDS-PAGE電泳圖譜顯示5號洗脫樣品泳道除目的蛋白條帶外，無明顯雜質條帶，且SEC純度>90 %，HCP殘留由原液的十幾萬ppm降低至幾千ppm，約28倍。
Table 1.Diamond MIX-A技術參數
2. 中度純化階段
第二步中度純化階段使用疏水層析介質。選擇疏水填料的關鍵在于選擇合適疏水強弱的配基。常見配基的疏水性強弱順序：Butyl-S＜Butyl＜Octyl＜Phenyl。
疏水填料通常采用結合洗脫模式，將樣品高鹽條件下上樣，常使用鹽濃度遞減的梯度從柱上洗脫樣品。隨著離子強度的降低，分子的親水區暴露增加，分子按疏水性遞增的順序從柱上洗脫出來。
中度純化階段進一步去除樣品中的雜質和降低HCP殘留。本案例在該階段使用Diamond Butyl Mustang填料純化某重組帶狀皰疹疫苗。
? 填料：Diamond Butyl Mustang
? 樣品：Diamond MIX-A洗脫處理后樣品
? 層析柱規格/柱高：BXK 16/20，柱高10 cm
Fig.2 Diamond Butyl Mustang純化某重組帶狀皰疹疫苗層析圖譜（左）和SDS-PAGE結果（右）
? 純化結果：SEC檢測純度提高了約3 %，HCP殘留降低至2000 ppm左右。
Table 2.Diamond Butyl Mustang技術參數
3. 精純階段
第三步精純階段使用陰離子層析+復合型強陰離子層析介質。陰離子層析介質偶連帶正電的功能基團（如季銨基、二乙氨基乙基），在中性條件下，能夠和帶負電荷的內毒素、HCD、HCP等雜質結合，因此陰離子層析是去除內毒素等雜質的一個關鍵步驟。
本案例在精純階段使用Diamond Q和Diamond MIX-A Mustang填料純化某重組帶狀皰疹疫苗。Diamond MIX-A Mustang相較Diamond MIX-A粒徑更小，分辨率更高。
? 填料：Diamond Q
? 樣品：Diamond Butyl Mustang洗脫樣品
? 層析柱規格/柱高：EzScreen 4.9 mL，柱高10 cm
Fig.3 Diamond Q純化某重組帶狀皰疹疫苗層析圖譜（左）和SDS-PAGE結果（右）
? 純化結果：SEC檢測純度無明顯提高，HCP殘留降低至幾百ppm。
? 填料：Diamond MIX-A Mustang
? 樣品：Diamond Q洗脫樣品
? 層析柱規格/柱高：EzScreen 4.9 mL，柱高10 cm
Fig.4 Diamond MIX-A Mustang純化某重組帶狀皰疹疫苗層析圖譜（左）和SDS-PAGE結果（右）
? 純化結果：SDS-PAGE電泳圖譜顯示洗脫樣品泳道背景干凈，無可見雜質條帶，SEC檢測純度提高至97 %以上，HCP殘留降低至200 ppm左右。
Table 3.Diamond Q和Diamond MIX-A Mustang技術參數
結論
使用博格隆四步層析法純化后，該重組帶狀皰疹疫苗最終SEC純度>97 %，HCP殘留降低至200 ppm左右，最終收率、純度和HCP殘留量均符合客戶要求。但是不同類型的帶狀皰疹，種類不同，質量要求不同，因此，層析填料的屬性要求也可能存在差異。
除標準產品外，博格隆還提供定制化解決方案，為您解決下游層析工藝研發、生產及工藝變更等過程中遇到的難題。
關于博格隆博格隆成立于2008年，是一家專注于為分離純化提供高質量層析介質的高新技術企業，是中國較早具備大規模生產分離純化介質能力的企業之一。博格隆所提供的產品涵蓋各類分離純化介質、預裝柱、實驗室及工業生產級空柱、微載體，同時提供分離純化工藝開發服務及填料定制。
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