合法和非法阿片類藥物使用日益普遍，導致越來越多胎兒發育過程中接觸這些藥物，這一現象令人擔憂。因為85%的阿片類藥物暴露兒童隨著年齡增長會面臨各種行為挑戰，包括情緒、認知和社交缺陷。推薦的阿片類藥物依賴治療方法是使用治療阿片類藥物使用障礙(MOUD)的藥物，例如methadone或buprenorphine，在孕期也可以使用。然而，methadone和buprenorphine可能會干擾胎兒的神經發育過程，導致不良的行為后果。

本研究旨在探討妊娠期母親methadone或buprenorphine暴露對后代雌雄幼年游戲行為和成年社交行為的代際影響，采用孕期母鼠(F0)暴露于MOUD后如何影響幼鼠和成年鼠第一代 (F1)和第二代(F2)的社交行為測試研究。

材料與方法
將59只雌性大鼠隨機分配到三個不同的暴露組：methadone、buprenorphine或對照組。每日對大鼠分別輸送10 mg/kg/天methadone和1 mg/kg/天buprenorphine或無菌水。除去死亡和未能成功交配的大鼠，總共有45只雌性（14 只對照、15 只methadone和 16 只buprenorphine）被納入作為F1代的母親。F1代大鼠完成行為學測試并達到15周齡后，用于繁殖F2代。共36只雌性和36只雄性F1代大鼠用于繁殖，分為12對對照組、11對methadone組和13對buprenorphine組。

社交游戲行為和超聲波發聲
在胎齡27-34周時，進行社交游戲行為測試。將每只大鼠與來自另一個籠子、性別和年齡匹配的陌生伙伴配對，一起放在測試籠中15分鐘。使用行為觀察記錄分析系統(The Observer XT)對每對動物的游戲行為進行手動評估。量化了與游戲相關的行為（猛撲、壓制和拳擊）的次數，以及用于社交和非社交探索的時間（表1）。在游戲過程中，使用連接到聲音行為分析系統(UltraVox XT)的超聲波麥克風記錄超聲波發聲(USV)。對前5分鐘內頻率在20至80 kHz之間的所有叫聲進行手動計數和分類（表2）。
 

表1
  表2

三室社交互動測試
10周齡時，對子代大鼠進行三室社交互動測試。測試裝置是一個有機玻璃盒，由帶有開口的玻璃分成三個大小相等的隔間。左右兩室的隔間中央各有一個鐵絲籠，用于飼養新來的大鼠。測試包括三個階段：習慣化（5 分鐘）、社交性測試（10 分鐘）和社交新奇性測試（10 分鐘）。在習慣化階段，將大鼠放置在中央隔間中，左右隔間的開口關閉。在社交性階段，將一個新的同性同種動物放置在側隔間的一個籠中，作為“社交刺激”，而位于另一側隔間的空籠則作為“非社交刺激”。隔板被抬起，允許大鼠在裝置的三個隔間中自由移動。在社交新奇階段，將第二個新的同性同種動物放置在空籠中。在社交性階段引入的同種動物現在作為“熟悉刺激”，而新的同種動物作為“新奇刺激”。使用攝像機記錄實驗過程，并使用 動物運動軌跡跟蹤系統(EthoVision XT)進行追蹤。測定小鼠在社交階段和社交新奇階段在不同房間內停留的時間。

  結果
雖然近年來我們對產前接觸 MOUD 對新生兒和幼兒影響的認識有所加深，但關于其對青少年期和成年期的影響仍然存在空白。此外，阿片類藥物引起的代際傳播的影響尚未引起足夠的重視。因此，本文旨在研究母體（F0）接觸methadone或buprenorphine后，F1和F2代雄性和雌性大鼠后代的幼年游戲行為和成年社交互動。

產前暴露于buprenorphine的幼鼠（F1）表現出社交游戲行為減少，表現為猛撲和壓制次數減少（圖1A-B），而猛撲和壓制是大鼠社交游戲行為的關鍵特征。游戲行為的減少在雄性幼鼠中最為明顯。還發現F2代幼鼠的社交游戲行為減少。F1代在產前暴露于buprenorphine，其后代表現出猛撲和壓制行為減少，這與F1代的發現一致。buprenorphineF2組的雄性和雌性均表現出猛撲和壓制行為減少（圖2A-B）。兩代幼鼠用于社交探索（例如嗅探或梳理伴侶）的時間均保持不變，表明buprenorphine特別影響與更具活力的社交行為（例如社交游戲）相關的方面。兩代存在性別差異：buprenorphine暴露對F1代男性的社交游戲行為產生顯著影響。在F2代中，methadone暴露父母的男性子女在社交探索上花費的時間顯著少于對照組，表明他們對社交互動的興趣降低，而女性則沒有觀察到任何影響。與女性相比，男性似乎更容易受到產前阿片類藥物暴露的長期影響。
  圖1
  圖2

社交游戲中USV數據顯示，暴露對F1代總叫聲次數或任何叫聲類型均無總體影響。成對比較顯示，F1代與對照組相比，出生前暴露于buprenorphine的F1雌性發出的顫音更多（圖3B，雌性）。對于社交游戲中的F2代USV，對總叫聲數量沒有總體影響。成對比較顯示，與對照組相比，methadone組的F2動物發出了更多的顫音，而buprenorphine組的動物發出了更多的短叫聲（圖4B，雄性+雌性）。此外，methadone組的雄性與對照組相比發出了更多的顫音（圖4B，雄性）。
 

圖3
  圖4

三室社交互動測試中，暴露對F1代社交性指數有總體影響，但成對比較顯示阿片類藥物暴露動物與對照組之間無顯著差異。性別對F1代社交新穎性指數有總體影響，其中雌性動物的社交新穎性指數高于雄性動物。未發現暴露和性別之間的相互作用，并且每個性別的暴露組之間無明顯差異。F2代無論是對社交性指數還是社交新穎性指數，暴露均無主效應。

總結
本文的研究首次揭示了阿片類藥物使用障礙(MOUD)的代際效應。孕期接觸buprenorphine（而非methadone）降低了F1代和F2代后代的社交游戲行為，表現為猛撲和壓制次數減少，而猛撲和壓制是大鼠社交游戲的兩個最典型參數。兩代成年大鼠的社交互動均未受到產前 MOUD暴露的影響。

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