用戶文章：結(jié)合質(zhì)譜蛋白質(zhì)測序解碼蛋白質(zhì)糖基化_abio生物試劑品牌網(wǎng)
糖蛋白占人類蛋白質(zhì)和大多數(shù)生物制藥產(chǎn)物的50%以上，蛋白質(zhì)糖基化作為最廣泛和最復(fù)雜的翻譯后修飾（PTM）之一，對調(diào)節(jié)各種生物過程至關(guān)重要。糖蛋白序列的綜合分析，包括糖基化位點和相關(guān)聚糖結(jié)構(gòu)的深度剖析，是糖蛋白功能研究的關(guān)鍵。液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS/MS）已成為蛋白質(zhì)鑒定和翻譯后修飾發(fā)現(xiàn)的強(qiáng)大工具。與糖蛋白質(zhì)組學(xué)中廣泛使用的數(shù)據(jù)庫搜索的策略不同，蛋白質(zhì)從頭測序無需事先了解DNA/氨基酸序列，用于未知蛋白的序列測定。然而，多糖基化位點的復(fù)雜性通常會使得質(zhì)譜很難獲得信息豐富的糖肽碎片離子，導(dǎo)致序列覆蓋不完整和游離寡糖修飾譜不明確，從而影響從頭測序的準(zhǔn)確性。
2025年初，上海藥物研究所的周虎研究員和文留青研究員聯(lián)合在Analytical Chemistry期刊聯(lián)合發(fā)表了一種結(jié)合質(zhì)譜蛋白質(zhì)從頭測序技術(shù)解碼未知糖蛋白的新方法：Decoding Protein Glycosylation by an Integrative Mass Spectrometry-Based De Novo Sequencing Strategy，方案設(shè)計見圖1。Fetuin-A（UniProt Accession no.P12763）是一種含有唾液酸化N糖和O糖的常用模型糖蛋白，作者首先基于Fetuin-A，用糖苷酶切除糖鏈后采集質(zhì)譜數(shù)據(jù)，使用PEAKS? AB完成蛋白質(zhì)序列的自動組裝，建立了糖蛋白的從頭測序方法，可獲得去糖基化蛋白的一級序列。接下來，使用高度復(fù)雜的糖基化蛋白藥物依那西普來驗證該方法的性能。隨后，作者應(yīng)用該方法鑒定了三種未知 TNFR:Fc 融合生物制劑的氨基酸序列，以探索它們與原研藥物依那西普的相似性。并且，從N糖基化位點、游離糖、糖蛋白亞單位、糖肽的多個層面進(jìn)行了深度糖基化表征，以精確定位 N?/ O-糖基化。該方法彌合了從頭測序和糖基化修飾分析之間的差距，提供了有關(guān)糖蛋白一級結(jié)構(gòu)和糖基化修飾的全面信息，在基礎(chǔ)研究和生物制藥行業(yè)均具有實用價值。
圖1 方案設(shè)計示意圖
方法與結(jié)果
糖蛋白從頭測序方法開發(fā)
使用PNGase F和O-糖苷酶 EngEF 分別去除Fetuin A上的 N糖和O糖，然后通過Intact Mass驗證糖基化切除效果。去除聚糖后，大多數(shù)酶切的序列覆蓋率顯著提高，chymotrypsin、Glu-C、pepsin和trypsin的序列覆蓋率均可達(dá)到90% 以上。考慮到不同酶切位點的互補(bǔ)性，后續(xù)將LysC、Elestase、chymotrypsin、Glu-C、pepsin和trypsin6種酶結(jié)合使用，結(jié)果如預(yù)期，去糖后的序列可信度進(jìn)一步提升。去除糖基后，糖肽骨架的鑒定更可靠，PEAKS? AB可直觀展示切糖前后的序列覆蓋情況（圖2）。
圖2 PEAKS
? AB序列覆蓋圖
獲得足夠豐富的多肽碎片離子對于揭示蛋白質(zhì)相鄰氨基酸的序列至關(guān)重要。EThcD碎裂可顯著增加MS/MS譜圖中豐富的碎片離子，有利于多肽序列和翻譯后修飾的鑒定，因此作者評估了EThcD碎裂方法與常用的階梯式HCD碎裂方法。結(jié)果表明，盡管de novo候選肽的總數(shù)少于HCD 方法，但 EThcd在肽序列長度（圖 3B）和譜圖質(zhì)量（圖 3C）方面更優(yōu)，EThcD譜中較長的多肽對于蛋白質(zhì)序列的組裝有利（圖3D-E）。更重要的是，考慮到測序準(zhǔn)確度，EThcD方法的平均序列準(zhǔn)確度高達(dá)98.3%的，而HCD的平均準(zhǔn)確度為95.8%且包含1個gap（圖3F）。
圖3 Fetuin A蛋白測序實驗方法比較
蛋白質(zhì)測序中，Ile-Leu（I-L）和Asn-Asp（N-D）的確證往往需要更多的譜圖信息。PNGase F切除N糖后，會將糖基化Asn殘基轉(zhuǎn)化為Asp，EThcD和HCD均可較好的鑒定出來。N-糖基化的Asn殘基可以通過18O標(biāo)記的肽圖分析法以及基于糖苷酶的方法進(jìn)行確定。值得注意的是，EThcD 方法在Leu/Ile測定方面具備獨特的優(yōu)勢，利用EThcD譜圖中w離子與z離子的質(zhì)量差（Leu,-43.05 Da；Ile,-29.04 Da），可明確鑒定蛋白序列中的I和L（例如肽 DIEIDTLETTCH，圖4）。
綜合以上結(jié)果，作者明確了蛋白質(zhì)測序的基本實驗方法，即切糖與EThCD采集方法結(jié)合。
圖4 EThcD示例肽段
依那西普從頭測序
為了測試前述蛋白質(zhì)從頭測序方法的穩(wěn)健性并證明在高度糖基化生物制藥中的應(yīng)用效果，作者對已上市的治療性Fc融合蛋白原藥依那西普進(jìn)行從頭測序。作為最復(fù)雜的高度糖基化Fc 融合生物藥物之一，依那西普具有至少3個N-和13個O-糖基化位點。對依那西普切除糖基化后，通過 EThcD 碎裂方法獲得MS/MS譜圖，用PEAKS? AB完成蛋白質(zhì)自動測序。三個重復(fù)樣本的測序結(jié)果的覆蓋度均達(dá)到98.93%，準(zhǔn)確度為99.57-100%（表 1）。同時，不切糖的常規(guī)策略無法完成序列組裝，可能是因為高度糖基化導(dǎo)致MS/MS譜過于復(fù)雜，形成的序列g(shù)ap較多，無法通過從頭測序算法和多酶酶切的方法解決（圖 5）。且未覆蓋的區(qū)域位于鉸鏈區(qū)，這在人類蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫中是不存在的，這表明使用標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫搜索方法推斷高度糖基化蛋白的全長一級序列具有挑戰(zhàn)性。總之，本研究方法能夠?qū)μ堑鞍走M(jìn)行從頭測序，并實現(xiàn)糖基化修飾區(qū)域的深度覆蓋。
表1 依那西普切糖測序重復(fù)性
圖5 不切糖的依那西普多酶酶切
未知TNFR:Fc融合生物制劑的從頭測序
應(yīng)用上述方法對三種依那西普的生物仿制藥TNFR:Fc融合生物制劑進(jìn)行測序。Intact Mass結(jié)果顯示，TNFR:Fc 2和TNFR:Fc 3與依那西普存在細(xì)微差異，而TNFR:Fc 1的完整質(zhì)量與依那西普相同。與之對應(yīng)，這三個生物制劑的測序結(jié)果顯示，有三個氨基酸存在差異，即M174R（在TNFR片段中）， E376D 和M378L（均在 Fc片段中）（圖 6A），對應(yīng)于變異位點的 MS/MS譜圖碎片離子質(zhì)量均較高（圖 6B-E）。此外，蛋白質(zhì)序列的差異與完整的蛋白質(zhì)質(zhì)量一致（圖 6F-G）。M174R上的序列變異是人TNFR 2編碼區(qū)的多態(tài)性導(dǎo)致的，根據(jù)報道，應(yīng)該與多囊卵巢綜合征、高雄激素血癥和系統(tǒng)性紅斑狼瘡有關(guān)。同樣，在市售的TNF 2受體-Fc 融合蛋白產(chǎn)品中也報道了Fc片段的E376D和M378L突變。我們使用 PEAKS? AB軟件的Sequence Validation工作流驗證了三個TNFR:Fc融合生物制劑蛋白序列。～99%的序列的可信度>85%，且每條肽段均有多張譜圖支持。因此，該結(jié)果證實了從頭測序結(jié)果的高精度。
圖6 未知TNFR:Fc融合蛋白測序
TNFR:Fc融合生物制劑的N-/O-糖基化分析
作者從N-糖基化位點鑒定、游離糖、糖蛋白亞基和糖肽多個水平對TNFR:Fc融合制劑進(jìn)行了全面的N和O糖基化剖析。首先通過18O標(biāo)記對N糖基化位點進(jìn)行定量（圖7A）。通過計算18O位點所在肽段的強(qiáng)度，在四個TNFR:Fc 融合蛋白樣品中篩選出三個N-糖基化位點（N149、N171 和 N317）（圖 7B），這三個N糖基化位點與依那西普中已知的N糖基化位點完全匹配。此外，作者通過內(nèi)切糖苷酶混合物（Endo CC、Endo S 和 Endo H）部分裂解 N糖，產(chǎn)生帶有"GlcNAc"/"GlcNAc?Fuc" 的N位點碎片，以確認(rèn)N-糖基化位點的鑒定結(jié)果（圖 7A、C）。使用酶切特異性更廣的糖苷酶混合物，對N糖鏈進(jìn)行充分切割，結(jié)果與18O標(biāo)記高度一致（圖 7D）。這些結(jié)果均可用于驗證從頭測序結(jié)果中的Asn或Asp。
圖7 N糖基化位點鑒定
為了在整個蛋白質(zhì)水平上確定N糖的含量和結(jié)構(gòu)，作者又用2-AB標(biāo)記對酶促釋放的N糖進(jìn)行衍生化，然后通過UPLC-HILIC-FLR-MS 進(jìn)行熒光和質(zhì)譜檢測。依那西普釋放的N糖中，最豐富的峰是 F(6)G2F（雙天線，核心巖藻糖基化，具有兩個末端半乳糖），其次是 F(6)G0F（雙天線，核心巖藻糖基化，無末端半乳糖殘基），G2（雙天線，具有兩個末端半乳糖殘基），以及 F(6)G1F（雙天線，核巖藻糖基化，帶有一個末端半乳糖殘基）（圖 8A）。三種TNFR：Fc融合生物制劑的結(jié)果與依那西普相似。然后，作者去除O糖和唾液酸，在亞基水平上評估了N糖的不同糖型。依那西普/TNFR:Fc 1的TNFR片段處豐度最高的糖型為G2 和 G2F（圖 8B）。而TNFR:Fc 3的TNFR片段除了主要糖型G2和G2F外，還包含許多G1F（圖 8C）。另一方面，盡管觀察到微小程度的賴氨酸丟失修飾，但在四個樣品中，F(xiàn)c片段處最突出的糖型均為G0F和G1F。
為了降低糖肽的復(fù)雜性和可變性，提高糖肽的酶切效率，作者將唾液酸酶與N-糖苷酶或O糖苷酶結(jié)合使用，以深入了解位點特異性 N-/O-糖基化。結(jié)果如圖8D，即N149、N171 和 N317 糖基化位點主要被G2、G2F 和G0F占據(jù)。N171是導(dǎo)致TNFR:Fc 3糖型差異的位點，含有大量的G1F。位點特異性N-糖肽結(jié)果與基于亞基水平的糖型分配一致，驗證了不同酶切水平下結(jié)果的一致性。
結(jié)合手動校驗糖肽譜圖，作者鑒定出了依那西普和3個TNFR:Fc 融合生物制劑上的13個O-糖基化位點（圖 8E）。與之前的報道的12個O-糖基化位點一致。在TNFR:Fc融合生物制劑中觀察到類似的糖基化模式。此外，對糖基化位點的分析揭示了鉸鏈區(qū)的高度糖基化（圖 8F）。盡管依那西普和 TNFR:Fc 融合生物制劑在骨架上存在結(jié)構(gòu)相似，但由于不同的制造工藝和細(xì)胞來源，它們在糖譜上表現(xiàn)出差異。這些發(fā)現(xiàn)突出了潛在的物理化學(xué)意義，值得進(jìn)一步研究，并有助于依那西普及其生物仿制藥的全面表征。
圖8 依那西普與融合制劑的糖型表征
原文鏈接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/jacsau.4c00960?ref=PDF
若您想深入了解PEAKS? AB的功能和應(yīng)用，可點擊“閱讀原文”提交您的咨詢信息。
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作為生物信息學(xué)的領(lǐng)軍企業(yè)，BSI專注于蛋白質(zhì)組學(xué)和生物藥領(lǐng)域，通過機(jī)器學(xué)習(xí)和先進(jìn)算法提供世界領(lǐng)先的質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析軟件和蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)解決方案，以推進(jìn)生物學(xué)研究和藥物發(fā)現(xiàn)。我們通過基于AI的計算方案，為您提供對蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)和醫(yī)學(xué)的卓越洞見。旗下著名的PEAKS ??系列軟件在全世界擁有數(shù)千家學(xué)術(shù)和工業(yè)用戶，包括：PEAKS ?? Studio，PEAKS ?? Online，PEAKS ?? GlycanFinder, PEAKS ?? AB，DeePImmu ?? 免疫肽組發(fā)現(xiàn)服務(wù)和抗體綜合表征服務(wù)等。
聯(lián)系方式：021-60919891；sales-china@bioinfor.com
2025年初，上海藥物研究所的周虎研究員和文留青研究員聯(lián)合在Analytical Chemistry期刊聯(lián)合發(fā)表了一種結(jié)合質(zhì)譜蛋白質(zhì)從頭測序技術(shù)解碼未知糖蛋白的新方法：Decoding Protein Glycosylation by an Integrative Mass Spectrometry-Based De Novo Sequencing Strategy，方案設(shè)計見圖1。Fetuin-A（UniProt Accession no.P12763）是一種含有唾液酸化N糖和O糖的常用模型糖蛋白，作者首先基于Fetuin-A，用糖苷酶切除糖鏈后采集質(zhì)譜數(shù)據(jù)，使用PEAKS? AB完成蛋白質(zhì)序列的自動組裝，建立了糖蛋白的從頭測序方法，可獲得去糖基化蛋白的一級序列。接下來，使用高度復(fù)雜的糖基化蛋白藥物依那西普來驗證該方法的性能。隨后，作者應(yīng)用該方法鑒定了三種未知 TNFR:Fc 融合生物制劑的氨基酸序列，以探索它們與原研藥物依那西普的相似性。并且，從N糖基化位點、游離糖、糖蛋白亞單位、糖肽的多個層面進(jìn)行了深度糖基化表征，以精確定位 N?/ O-糖基化。該方法彌合了從頭測序和糖基化修飾分析之間的差距，提供了有關(guān)糖蛋白一級結(jié)構(gòu)和糖基化修飾的全面信息，在基礎(chǔ)研究和生物制藥行業(yè)均具有實用價值。
圖1 方案設(shè)計示意圖
方法與結(jié)果
糖蛋白從頭測序方法開發(fā)
使用PNGase F和O-糖苷酶 EngEF 分別去除Fetuin A上的 N糖和O糖，然后通過Intact Mass驗證糖基化切除效果。去除聚糖后，大多數(shù)酶切的序列覆蓋率顯著提高，chymotrypsin、Glu-C、pepsin和trypsin的序列覆蓋率均可達(dá)到90% 以上。考慮到不同酶切位點的互補(bǔ)性，后續(xù)將LysC、Elestase、chymotrypsin、Glu-C、pepsin和trypsin6種酶結(jié)合使用，結(jié)果如預(yù)期，去糖后的序列可信度進(jìn)一步提升。去除糖基后，糖肽骨架的鑒定更可靠，PEAKS? AB可直觀展示切糖前后的序列覆蓋情況（圖2）。
圖2 PEAKS
? AB序列覆蓋圖
獲得足夠豐富的多肽碎片離子對于揭示蛋白質(zhì)相鄰氨基酸的序列至關(guān)重要。EThcD碎裂可顯著增加MS/MS譜圖中豐富的碎片離子，有利于多肽序列和翻譯后修飾的鑒定，因此作者評估了EThcD碎裂方法與常用的階梯式HCD碎裂方法。結(jié)果表明，盡管de novo候選肽的總數(shù)少于HCD 方法，但 EThcd在肽序列長度（圖 3B）和譜圖質(zhì)量（圖 3C）方面更優(yōu)，EThcD譜中較長的多肽對于蛋白質(zhì)序列的組裝有利（圖3D-E）。更重要的是，考慮到測序準(zhǔn)確度，EThcD方法的平均序列準(zhǔn)確度高達(dá)98.3%的，而HCD的平均準(zhǔn)確度為95.8%且包含1個gap（圖3F）。
圖3 Fetuin A蛋白測序實驗方法比較
蛋白質(zhì)測序中，Ile-Leu（I-L）和Asn-Asp（N-D）的確證往往需要更多的譜圖信息。PNGase F切除N糖后，會將糖基化Asn殘基轉(zhuǎn)化為Asp，EThcD和HCD均可較好的鑒定出來。N-糖基化的Asn殘基可以通過18O標(biāo)記的肽圖分析法以及基于糖苷酶的方法進(jìn)行確定。值得注意的是，EThcD 方法在Leu/Ile測定方面具備獨特的優(yōu)勢，利用EThcD譜圖中w離子與z離子的質(zhì)量差（Leu,-43.05 Da；Ile,-29.04 Da），可明確鑒定蛋白序列中的I和L（例如肽 DIEIDTLETTCH，圖4）。
綜合以上結(jié)果，作者明確了蛋白質(zhì)測序的基本實驗方法，即切糖與EThCD采集方法結(jié)合。
圖4 EThcD示例肽段
依那西普從頭測序
為了測試前述蛋白質(zhì)從頭測序方法的穩(wěn)健性并證明在高度糖基化生物制藥中的應(yīng)用效果，作者對已上市的治療性Fc融合蛋白原藥依那西普進(jìn)行從頭測序。作為最復(fù)雜的高度糖基化Fc 融合生物藥物之一，依那西普具有至少3個N-和13個O-糖基化位點。對依那西普切除糖基化后，通過 EThcD 碎裂方法獲得MS/MS譜圖，用PEAKS? AB完成蛋白質(zhì)自動測序。三個重復(fù)樣本的測序結(jié)果的覆蓋度均達(dá)到98.93%，準(zhǔn)確度為99.57-100%（表 1）。同時，不切糖的常規(guī)策略無法完成序列組裝，可能是因為高度糖基化導(dǎo)致MS/MS譜過于復(fù)雜，形成的序列g(shù)ap較多，無法通過從頭測序算法和多酶酶切的方法解決（圖 5）。且未覆蓋的區(qū)域位于鉸鏈區(qū)，這在人類蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫中是不存在的，這表明使用標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫搜索方法推斷高度糖基化蛋白的全長一級序列具有挑戰(zhàn)性。總之，本研究方法能夠?qū)μ堑鞍走M(jìn)行從頭測序，并實現(xiàn)糖基化修飾區(qū)域的深度覆蓋。
表1 依那西普切糖測序重復(fù)性
圖5 不切糖的依那西普多酶酶切
未知TNFR:Fc融合生物制劑的從頭測序
應(yīng)用上述方法對三種依那西普的生物仿制藥TNFR:Fc融合生物制劑進(jìn)行測序。Intact Mass結(jié)果顯示，TNFR:Fc 2和TNFR:Fc 3與依那西普存在細(xì)微差異，而TNFR:Fc 1的完整質(zhì)量與依那西普相同。與之對應(yīng)，這三個生物制劑的測序結(jié)果顯示，有三個氨基酸存在差異，即M174R（在TNFR片段中）， E376D 和M378L（均在 Fc片段中）（圖 6A），對應(yīng)于變異位點的 MS/MS譜圖碎片離子質(zhì)量均較高（圖 6B-E）。此外，蛋白質(zhì)序列的差異與完整的蛋白質(zhì)質(zhì)量一致（圖 6F-G）。M174R上的序列變異是人TNFR 2編碼區(qū)的多態(tài)性導(dǎo)致的，根據(jù)報道，應(yīng)該與多囊卵巢綜合征、高雄激素血癥和系統(tǒng)性紅斑狼瘡有關(guān)。同樣，在市售的TNF 2受體-Fc 融合蛋白產(chǎn)品中也報道了Fc片段的E376D和M378L突變。我們使用 PEAKS? AB軟件的Sequence Validation工作流驗證了三個TNFR:Fc融合生物制劑蛋白序列。～99%的序列的可信度>85%，且每條肽段均有多張譜圖支持。因此，該結(jié)果證實了從頭測序結(jié)果的高精度。
圖6 未知TNFR:Fc融合蛋白測序
TNFR:Fc融合生物制劑的N-/O-糖基化分析
作者從N-糖基化位點鑒定、游離糖、糖蛋白亞基和糖肽多個水平對TNFR:Fc融合制劑進(jìn)行了全面的N和O糖基化剖析。首先通過18O標(biāo)記對N糖基化位點進(jìn)行定量（圖7A）。通過計算18O位點所在肽段的強(qiáng)度，在四個TNFR:Fc 融合蛋白樣品中篩選出三個N-糖基化位點（N149、N171 和 N317）（圖 7B），這三個N糖基化位點與依那西普中已知的N糖基化位點完全匹配。此外，作者通過內(nèi)切糖苷酶混合物（Endo CC、Endo S 和 Endo H）部分裂解 N糖，產(chǎn)生帶有"GlcNAc"/"GlcNAc?Fuc" 的N位點碎片，以確認(rèn)N-糖基化位點的鑒定結(jié)果（圖 7A、C）。使用酶切特異性更廣的糖苷酶混合物，對N糖鏈進(jìn)行充分切割，結(jié)果與18O標(biāo)記高度一致（圖 7D）。這些結(jié)果均可用于驗證從頭測序結(jié)果中的Asn或Asp。
圖7 N糖基化位點鑒定
為了在整個蛋白質(zhì)水平上確定N糖的含量和結(jié)構(gòu)，作者又用2-AB標(biāo)記對酶促釋放的N糖進(jìn)行衍生化，然后通過UPLC-HILIC-FLR-MS 進(jìn)行熒光和質(zhì)譜檢測。依那西普釋放的N糖中，最豐富的峰是 F(6)G2F（雙天線，核心巖藻糖基化，具有兩個末端半乳糖），其次是 F(6)G0F（雙天線，核心巖藻糖基化，無末端半乳糖殘基），G2（雙天線，具有兩個末端半乳糖殘基），以及 F(6)G1F（雙天線，核巖藻糖基化，帶有一個末端半乳糖殘基）（圖 8A）。三種TNFR：Fc融合生物制劑的結(jié)果與依那西普相似。然后，作者去除O糖和唾液酸，在亞基水平上評估了N糖的不同糖型。依那西普/TNFR:Fc 1的TNFR片段處豐度最高的糖型為G2 和 G2F（圖 8B）。而TNFR:Fc 3的TNFR片段除了主要糖型G2和G2F外，還包含許多G1F（圖 8C）。另一方面，盡管觀察到微小程度的賴氨酸丟失修飾，但在四個樣品中，F(xiàn)c片段處最突出的糖型均為G0F和G1F。
為了降低糖肽的復(fù)雜性和可變性，提高糖肽的酶切效率，作者將唾液酸酶與N-糖苷酶或O糖苷酶結(jié)合使用，以深入了解位點特異性 N-/O-糖基化。結(jié)果如圖8D，即N149、N171 和 N317 糖基化位點主要被G2、G2F 和G0F占據(jù)。N171是導(dǎo)致TNFR:Fc 3糖型差異的位點，含有大量的G1F。位點特異性N-糖肽結(jié)果與基于亞基水平的糖型分配一致，驗證了不同酶切水平下結(jié)果的一致性。
結(jié)合手動校驗糖肽譜圖，作者鑒定出了依那西普和3個TNFR:Fc 融合生物制劑上的13個O-糖基化位點（圖 8E）。與之前的報道的12個O-糖基化位點一致。在TNFR:Fc融合生物制劑中觀察到類似的糖基化模式。此外，對糖基化位點的分析揭示了鉸鏈區(qū)的高度糖基化（圖 8F）。盡管依那西普和 TNFR:Fc 融合生物制劑在骨架上存在結(jié)構(gòu)相似，但由于不同的制造工藝和細(xì)胞來源，它們在糖譜上表現(xiàn)出差異。這些發(fā)現(xiàn)突出了潛在的物理化學(xué)意義，值得進(jìn)一步研究，并有助于依那西普及其生物仿制藥的全面表征。
圖8 依那西普與融合制劑的糖型表征
原文鏈接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/jacsau.4c00960?ref=PDF
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