抗豬肺炎支原體（Mhp）單克隆抗體的抗體特性、制備方法及特異性_abio生物試劑品牌網
抗豬肺炎支原體（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）單克隆抗體的相關參數需結合其病原特性、制備工藝及應用場景確定，以下從毒株型號、抗體特性、制備方法及特異性等方面詳細介紹： 一、豬肺炎支原體常用毒株型號 豬肺炎支原體是引起豬支原體肺炎（喘氣?。┑牟≡涠局晷吞柛鶕蛛x地區和時間不同而有所差異，常見毒株如下： 國際標準毒株： J 株：最早從美國病豬中分離，是研究和疫苗生產的經典毒株，基因組序列已公布（GenBank 登錄號：CP006945）。 232 株：美國分離株，常用于疫苗效力評價和抗體檢測標準品。 中國流行毒株： 168 株：中國早期分離的強毒株，用于國內疫苗（如豬肺炎支原體滅活疫苗）的生產。 HN06 株、SH 株：近年國內流行的高毒力變異株，其黏附蛋白（如 P97、P102）抗原性與經典毒株存在差異。 其他地區毒株：如歐洲的 7448 株、澳大利亞的 AP 株等，不同毒株的表面蛋白（如 P97、P65、P116）氨基酸序列同源性約 85%~95%，但部分高變區可能影響抗體識別。
二、抗豬肺炎支原體單克隆抗體的特性 抗體類型與亞型 單克隆抗體（mAb）多為 IgG 類，常見亞型為 IgG1 或 IgG2a（取決于小鼠品系，如 BALB/c 小鼠制備的抗體），少數為 IgM（初篩階段可能出現）。 抗體效價與親和力 效價：間接 ELISA 檢測中，腹水抗體效價通?！?×10?，細胞培養上清效價≥1×10?，高親和力抗體可通過生物層干涉技術（BLI）或表面等離子共振（SPR）測定，KD 值可達 10??~10?11 M。
三、抗豬肺炎支原體單克隆抗體制備方法及關鍵參數 （一）制備流程關鍵步驟 抗原制備 天然抗原：培養 Mhp 菌株（如 J 株、168 株），通過超聲波破碎或凍融法釋放抗原，經超離心和層析純化獲得全菌抗原或表面蛋白（如 P97、P65）。 重組抗原：利用原核（如 E. coli）或真核（如畢赤酵母）表達系統制備重組 P97 蛋白（尤其是 C 端高保守區 P97???），純度需≥95%（SDS-PAGE 檢測）。 動物免疫 免疫方案：6~8 周齡 BALB/c 小鼠，皮下或腹腔注射抗原（50~100 μg / 只），佐劑（弗氏完全佐劑 / 不完全佐劑）混合，免疫周期 4~6 周，末次免疫后 3 天取脾細胞。 雜交瘤細胞制備 脾細胞與骨髓瘤細胞（如 SP2/0）按 5:1 比例融合，PEG 1500（50% 濃度）誘導融合，融合效率約 10%~20%，需在 HAT 培養基中篩選雜交瘤細胞。 抗體篩選 雙篩選策略： ELISA 篩選：以 Mhp 抗原包被，檢測培養上清與 J 株、168 株等毒株的結合活性。 免疫熒光（IFA）或 Western blot：驗證抗體對 Mhp 天然蛋白的識別能力，排除識別培養基雜質的假陽性。 中和試驗（可選）：部分研究通過 Mhp 黏附抑制試驗篩選能阻斷細菌黏附宿主細胞的中和抗體（如抑制 P97 與豬氣管上皮細胞結合）。 克隆化與抗體生產 有限稀釋法克隆化 2~3 次，確保單克隆性；腹水誘生法（腹腔注射 Pristane 預處理小鼠）可獲得高濃度抗體（1~10 mg/mL），細胞培養法適用于大規模純化。 （二）制備關鍵參數 抗原純度：重組 P97 蛋白需通過 Ni-NTA 層析和凝膠過濾純化，內毒素含量＜0.1 EU/μg（鱟試劑檢測），避免免疫反應干擾。 融合后篩選陽性率：初次篩選中，陽性雜交瘤細胞比例通常＜5%，需通過多輪克隆化提高穩定性。
四、抗豬肺炎支原體單克隆抗體的特異性 抗原特異性 種屬特異性：理想抗體應僅識別 Mhp，與其他豬支原體（如豬鼻支原體、豬關節炎支原體）無交叉反應，可通過交叉 ELISA 驗證：與其他支原體的交叉反應率＜5%。 毒株廣譜性：針對 P97 等保守蛋白的抗體需能識別 J 株、168 株、HN06 株等流行毒株，ELISA 結合活性差異≤20%。 表位特異性 中和表位：靶向 P97???結構域（如氨基酸殘基 459~516）的抗體具有黏附抑制活性，中和效價（抑制 50% 黏附的抗體濃度）＜10 μg/mL。 非中和表位：靶向 P65、P116 等表面蛋白的抗體常用于診斷（如 ELISA、免疫組化），但無中和功能。 應用場景特異性 診斷用抗體：需對 Mhp 抗原具有高敏感性（檢測限＜10 ng/mL），且能區分活疫苗株（如 168 株）與野毒株（如 HN06 株）。 治療用抗體：需兼具高中和活性和低免疫原性，可通過抗體人源化改造降低異種免疫反應。
五、典型單克隆抗體實例（參考研究數據） 抗體編號靶向抗原亞型中和活性（黏附抑制率）交叉反應應用 4B7 P97???（C 端） IgG1 85%（10 μg/mL） 與豬鼻支原體＜1% 中和治療、診斷 2F5 全菌膜蛋白 IgG2a 無 與 Mhp 各毒株結合率＞95% 免疫組化（肺組織檢測） 7C11 重組 P65 蛋白 IgG1 無 與其他支原體交叉率＜3% ELISA 檢測抗原捕獲
六、注意事項 毒株變異影響：近年流行的 Mhp 高毒力株（如中國 HN06 株）在 P97 基因的可變區（VR1、VR2）存在氨基酸突變，制備的抗體需驗證對變異株的識別能力，避免診斷假陰性。 抗體應用優化：用于豬群檢測時，需考慮豬血清中天然抗體的干擾（如使用競爭 ELISA 法）；治療用抗體需通過豬攻毒實驗驗證保護效果（如降低肺病變評分）。 如需更具體的參數，可參考《Veterinary Microbiology》等期刊中 Mhp 單克隆抗體制備的研究文獻，或咨詢商業抗體供應商（如 VMRD、Biosera）的技術資料。
二、抗豬肺炎支原體單克隆抗體的特性 抗體類型與亞型 單克隆抗體（mAb）多為 IgG 類，常見亞型為 IgG1 或 IgG2a（取決于小鼠品系，如 BALB/c 小鼠制備的抗體），少數為 IgM（初篩階段可能出現）。 抗體效價與親和力 效價：間接 ELISA 檢測中，腹水抗體效價通?！?×10?，細胞培養上清效價≥1×10?，高親和力抗體可通過生物層干涉技術（BLI）或表面等離子共振（SPR）測定，KD 值可達 10??~10?11 M。
三、抗豬肺炎支原體單克隆抗體制備方法及關鍵參數 （一）制備流程關鍵步驟 抗原制備 天然抗原：培養 Mhp 菌株（如 J 株、168 株），通過超聲波破碎或凍融法釋放抗原，經超離心和層析純化獲得全菌抗原或表面蛋白（如 P97、P65）。 重組抗原：利用原核（如 E. coli）或真核（如畢赤酵母）表達系統制備重組 P97 蛋白（尤其是 C 端高保守區 P97???），純度需≥95%（SDS-PAGE 檢測）。 動物免疫 免疫方案：6~8 周齡 BALB/c 小鼠，皮下或腹腔注射抗原（50~100 μg / 只），佐劑（弗氏完全佐劑 / 不完全佐劑）混合，免疫周期 4~6 周，末次免疫后 3 天取脾細胞。 雜交瘤細胞制備 脾細胞與骨髓瘤細胞（如 SP2/0）按 5:1 比例融合，PEG 1500（50% 濃度）誘導融合，融合效率約 10%~20%，需在 HAT 培養基中篩選雜交瘤細胞。 抗體篩選 雙篩選策略： ELISA 篩選：以 Mhp 抗原包被，檢測培養上清與 J 株、168 株等毒株的結合活性。 免疫熒光（IFA）或 Western blot：驗證抗體對 Mhp 天然蛋白的識別能力，排除識別培養基雜質的假陽性。 中和試驗（可選）：部分研究通過 Mhp 黏附抑制試驗篩選能阻斷細菌黏附宿主細胞的中和抗體（如抑制 P97 與豬氣管上皮細胞結合）。 克隆化與抗體生產 有限稀釋法克隆化 2~3 次，確保單克隆性；腹水誘生法（腹腔注射 Pristane 預處理小鼠）可獲得高濃度抗體（1~10 mg/mL），細胞培養法適用于大規模純化。 （二）制備關鍵參數 抗原純度：重組 P97 蛋白需通過 Ni-NTA 層析和凝膠過濾純化，內毒素含量＜0.1 EU/μg（鱟試劑檢測），避免免疫反應干擾。 融合后篩選陽性率：初次篩選中，陽性雜交瘤細胞比例通常＜5%，需通過多輪克隆化提高穩定性。
四、抗豬肺炎支原體單克隆抗體的特異性 抗原特異性 種屬特異性：理想抗體應僅識別 Mhp，與其他豬支原體（如豬鼻支原體、豬關節炎支原體）無交叉反應，可通過交叉 ELISA 驗證：與其他支原體的交叉反應率＜5%。 毒株廣譜性：針對 P97 等保守蛋白的抗體需能識別 J 株、168 株、HN06 株等流行毒株，ELISA 結合活性差異≤20%。 表位特異性 中和表位：靶向 P97???結構域（如氨基酸殘基 459~516）的抗體具有黏附抑制活性，中和效價（抑制 50% 黏附的抗體濃度）＜10 μg/mL。 非中和表位：靶向 P65、P116 等表面蛋白的抗體常用于診斷（如 ELISA、免疫組化），但無中和功能。 應用場景特異性 診斷用抗體：需對 Mhp 抗原具有高敏感性（檢測限＜10 ng/mL），且能區分活疫苗株（如 168 株）與野毒株（如 HN06 株）。 治療用抗體：需兼具高中和活性和低免疫原性，可通過抗體人源化改造降低異種免疫反應。
五、典型單克隆抗體實例（參考研究數據） 抗體編號靶向抗原亞型中和活性（黏附抑制率）交叉反應應用 4B7 P97???（C 端） IgG1 85%（10 μg/mL） 與豬鼻支原體＜1% 中和治療、診斷 2F5 全菌膜蛋白 IgG2a 無 與 Mhp 各毒株結合率＞95% 免疫組化（肺組織檢測） 7C11 重組 P65 蛋白 IgG1 無 與其他支原體交叉率＜3% ELISA 檢測抗原捕獲
六、注意事項 毒株變異影響：近年流行的 Mhp 高毒力株（如中國 HN06 株）在 P97 基因的可變區（VR1、VR2）存在氨基酸突變，制備的抗體需驗證對變異株的識別能力，避免診斷假陰性。 抗體應用優化：用于豬群檢測時，需考慮豬血清中天然抗體的干擾（如使用競爭 ELISA 法）；治療用抗體需通過豬攻毒實驗驗證保護效果（如降低肺病變評分）。 如需更具體的參數，可參考《Veterinary Microbiology》等期刊中 Mhp 單克隆抗體制備的研究文獻，或咨詢商業抗體供應商（如 VMRD、Biosera）的技術資料。
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