目前，人們越來越意識到高膽固醇飲食(HCD)的危害，因為它可能導(dǎo)致肥胖、高脂血癥和其他健康問題。其中，高脂血癥會增加脂肪肝、高血壓、動脈粥樣硬化、血栓形成和腦血管疾病的風(fēng)險。有研究表明，中醫(yī)藥中的丹參（Radix Salvia Miltiorrhizae）和紅花（Flos Carthami）對高脂血癥有良好的療效。已有研究證明，丹參中的Protocatechualdehyde（PCA）可以保護心血管系統(tǒng)免受氧化應(yīng)激和動脈粥樣硬化的影響，并減少心臟肥大，而作為紅花的成分，hydroxysafflor yellow A（HSYA）可以降低血脂水平，調(diào)節(jié)血管收縮，維持舒張功能，兩者都已被證明可以預(yù)防和治療動脈粥樣硬化。

在過往的研究中，斑馬魚是研究脂質(zhì)代謝的熱門動物，例如脂肪肝、高脂血癥、糖尿病等。它具有體積小和光學(xué)透明的優(yōu)點，可用于評估體內(nèi)藥物的療效和毒性，并且魚類和哺乳動物在脂質(zhì)代謝方面存在許多相似之處。本文的研究使用高膽固醇飲食（HCD）喂養(yǎng)的斑馬魚作為高脂血癥模型，探討了PCA、HSYA和PCA+HSYA對高脂血癥引起的問題和肝功能損傷的影響。

材料與方法
對野生型（AB）斑馬魚進行每天兩次喂食，對照組進行普通飼料喂養(yǎng)，高膽固醇飲食組進行高膽固醇飲食喂養(yǎng)。對斑馬魚幼魚進行毒性評估，并測定和高血脂相關(guān)的甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的檢測，以及斑馬魚幼魚行為學(xué)分析、血流動力學(xué)分析等其他相關(guān)測試（本文僅介紹部分研究內(nèi)容，想閱讀完整內(nèi)容，歡迎查看原文）。

在行為學(xué)分析中，每個實驗組對幼魚使用斑馬魚行為軌跡跟蹤系統(tǒng)(DanioVision)進行分析。將斑馬魚幼魚分別放置在DanioVision的96孔板中，使其適應(yīng)環(huán)境，然后開始記錄1小時的行為。使用動物運動軌跡跟蹤系統(tǒng)(EthoVision XT)分析和處理視頻，并量化一小時內(nèi)的總移動距離和平均速度。

在血流動力學(xué)分析中，在以HCD喂養(yǎng)并暴露于PCA、HSYA和PCA +HSYA后，對斑馬魚幼魚進行視頻記錄，以評估血流。通過斑馬魚微視行為分析系統(tǒng)（DanioScope）分析視頻標(biāo)記區(qū)域中紅細(xì)胞的運動來評估血流活動，并將結(jié)果進行比較。

  結(jié)果
經(jīng)過48小時的高膽固醇飲食（HCD）處理后，斑馬魚幼魚HCD組的總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和甘油三酯（TG）水平顯著高于對照組，而高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）值則顯著降低（圖1）。與HCD組相比，經(jīng)過48小時的PCA和HSYA處理后，TC、LDL-C和TG顯著降低，但HDL-C升高，且聯(lián)合使用效果優(yōu)于單獨使用。這表明PCA、HSYA和PCA + HSYA對高脂血癥斑馬魚具有有效的降脂作用，且呈劑量依賴性。
 
圖1   圖2

圖2A顯示了斑馬魚幼魚的運動軌跡。對照組斑馬魚幼魚的總移動距離和平均速度大于HCD處理組幼魚的總移動距離和平均速度，表明運動距離和速度受到HCD喂養(yǎng)的影響；喂食HCD并補充PCA、HSYA和PCA + HSYA處理的幼魚的總移動距離和平均速度如圖2B–C所示。

研究進一步評估了PCA和HSYA對斑馬魚血液動力學(xué)的影響。如圖3所示，與對照組相比，HCD斑馬魚幼魚的血流活動顯著降低；當(dāng)給予PCA、HSYA和PCA + HSYA時，血流活動增加，且PCA +HSYA的效果優(yōu)于單獨使用。結(jié)果表明，PCA +HSYA可以改善斑馬魚的血液高凝狀態(tài)。

圖3
  圖4

為了進一步研究HCD飲食對斑馬魚幼魚肝臟脂肪變性的影響以及PCA和HSYA的改善作用，研究對肝臟組織進行了組織病理學(xué)觀察。組織病理學(xué)結(jié)果表明，對照組的肝臟組織完整。然而，在HCD飲食組和辛伐他汀組（Sim）中，肝臟組織中出現(xiàn)了大量空泡，肝細(xì)胞變形且排列不規(guī)則。相比之下，PCA、HSYA及其聯(lián)合用藥可改善斑馬魚幼魚的肝臟脂肪變性并恢復(fù)肝臟組織結(jié)構(gòu)，特別是在PCA + HSYA-H組中（圖4）。這表明辛伐他汀（Sim）對改善肝功能沒有明顯效果，而PCA和HSYA對改善肝功能有明顯效果。

總結(jié)
高脂血癥是最常見的血脂水平異常疾病之一，也是導(dǎo)致心血管疾病發(fā)生的主要危險因素之一，可導(dǎo)致動脈粥樣硬化。在本研究中，建立了HCD喂養(yǎng)的高脂血癥斑馬魚模型，斑馬魚在研究脂質(zhì)代謝和脂質(zhì)異常方面的優(yōu)勢在于其光學(xué)透明性。PCA和HSYA分別是丹參和紅花的活性成分，在高脂血癥模型中，PCA、HSYA和PCA + HSYA對高脂血癥斑馬魚具有有效的降脂作用，且呈現(xiàn)劑量依賴性。并且，PCA +HSYA可以改善斑馬魚的血液高凝狀態(tài)，同時PCA和HSYA對改善肝功能有明顯效果。這些結(jié)果可能為研究PCA和HSYA改善高脂血癥的治療機制以及為未來高脂血癥的臨床應(yīng)用開發(fā)相關(guān)藥物提供新的思路。

參考文獻
Lin, Bingying, et al. “LiPId regulation of protocatechualdehyde and hydroxysafflor yellow A via AMPK/SREBP2/PCSK9/LDLR signaling pathway in hyperlipidemic zebrafish.” Heliyon 10.3 (2024).

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