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細胞計數儀與活細胞成像儀助力病毒轉染實驗效率翻倍_abio生物試劑品牌網

abiopp5個月前 (07-15)技術40
病毒是一類非細胞性病原體,其結構很簡單,主要結構包括核酸和結構蛋白,部分病毒還存在一些脂質包膜,就像HIV和流感病毒。HIV(人類免疫缺陷病毒1型)是一種包膜型逆轉錄病毒,其病毒粒子由包膜(envelope)、衣殼(capsid)和病毒核心(viral core)構成,各組分通過精密組裝實現宿主細胞感染及復制功能。  
除了我們常見的HIV之外,我們日常中常見的病毒其實還有很多種,包括慢病毒,腺病毒,腺相關病毒和逆轉錄病毒。其中慢病毒常被用于細胞轉染來獲得過表達基因產物;腺病毒常被用于疫苗開發,腫瘤治療和瞬時基因表達研究;腺相關病毒會被用在遺傳病治療,例如脊髓性肌萎縮癥,包括神經科學的研究以及眼科疾病的研究;逆轉錄病毒,因為僅感染分裂期的細胞,因此它的核心應用一般都是在造血系統的改造和體外基因編輯上,也因為它具有穩定的整合能力,并且能夠快速獲得擴增的細胞,因此通常會被用在基因編輯中。
    病毒作用機制
  以慢病毒載體為例,慢病毒與宿主細胞表面的受體結合后,它會通過受體結合的方式來進入細胞,同時將外源基因釋放到細胞質中,由于細胞核是多孔的結構,所以病毒的遺傳物質很容易入核,并在細胞核中表達。
病毒轉染過程中可能存在的問題以及解決方案

在病毒轉染過程中往往存在一些難以把控的因素,如病毒的拷貝數、細胞處于分裂期的具體情況、后期轉染效率的監測、安全性問題等。在這些過程中,我們需要做好標準化的處理和應對。
 
轉染前準備嚴格控制起始轉染細胞梳理。選擇細胞計數儀精準測定細胞密度,確保轉染時細胞處于最佳生長狀態(如70-80%匯合度),避免因細胞量偏差導致轉染失??!
實時監控、數據可靠活細胞成像儀全程無創追蹤轉染后細胞動態:從病毒吸附到基因表達,熒光標記一目了然!還能分析細胞存活率,告別“盲測”時代。支持長時間動態追蹤,減少人工取樣誤差,提供有效數據。
轉染效率快速檢測:前期確認合適轉染條件后,考慮外來基因整合到宿主細胞長期傳代可能導致目的基因丟失,可借助細胞分析儀對細胞熒光表達進行鑒定。通過細胞分析儀能夠非常直觀地判斷出長期傳代后的基因表達水平,并及時對丟失掉目的基因的細胞進行再次轉染,穩定基因表達強度。
病毒轉染專屬實驗流程

①選擇合適的細胞培養板并接種適量的細胞
②基于實驗需求,設置實驗組和對照組
③質粒轉染
④細胞樣本置于培養箱中活細胞成像儀上穩定培養觀察記錄
⑤轉染結果分析,使用JuLI Stage活細胞成像儀延時成像監測,自動生成視頻,基于圖像進行轉染效率定量
   

JuLI Stage 活細胞成像儀助力轉染實驗文獻案例

維也納醫科大學癌癥研究中心實驗組于 Drug Resistance Updates ( IF 15.8 ) 發表文獻,其中HEK293 細胞中轉染 pRetroX-G1-mCherry-puro,向細胞中加入多柔比星 (DOX)、  順鉑 (CIS) 或奧拉帕尼 (OLA)處理120 小時,使用JuLI Stage活細胞成像儀每半小時拍攝一次,監測轉基因表達。通過結果可以實時對比觀察在不同處理下轉染效率的差異,與對照組相比,細胞處理后在 G1 期逐漸積累,導致生長停滯。
 
高效轉染,工具先行!病毒轉染實驗的挑戰在于細節的把控。精準的細胞計數是成功的前提,實時的活細胞成像則是洞察過程、驗證結果的利器。細胞計數儀與活細胞成像儀的強強聯合,通過提供起始點的精確性和全過程的透明化,真正實現了實驗效率的“翻倍”。告別模糊與猜測,擁抱精準與高效——讓這兩款必備工具成為您病毒轉染實驗流程中的標準配置,顯著提升您的研究產出與成功率。

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