Annexin V 熒光染料是細胞生物學和醫學研究中用于檢測 細胞凋亡的核心工具之一。它是膜聯蛋白家族中的一種細胞蛋白，該家族蛋白質具有鈣離子依賴性結合陰離子磷脂的特性。雖然其具體細胞功能尚未完全闡明，但現有研究表明其主要參與凝血過程。在細胞健康狀態分析中，膜聯蛋白V通過特異性結合磷脂酰絲氨酸（PS）來識別凋亡細胞。PS原本存在于細胞膜內側小葉，當細胞啟動凋亡程序時，PS會外翻至細胞膜外側。為便于檢測和定量，膜聯蛋白V偶聯物通常標記有熒光素、藻膽蛋白或半抗原分子（如生物素）。
 
核心功能 
1.特異性結合磷脂酰絲氨酸： Annexin V 是一種鈣離子依賴的磷脂結合蛋白，對細胞膜磷脂酰絲氨酸具有極高的親和力和特異性。
2.標記凋亡細胞： 在健康的活細胞中，磷脂酰絲氨酸主要分布在細胞膜的內側（胞質面）。在細胞凋亡的早期階段，磷脂酰絲氨酸會從細胞膜內側翻轉到外側（暴露在細胞表面）。Annexin V 熒光染料能夠結合到這些暴露在外側的磷脂酰絲氨酸上，從而將凋亡細胞（尤其是早期凋亡細胞）標記出來。
3.區分凋亡階段： 通常需要與另一種染料 碘化丙啶 結合使用：
Annexin V 陽性 / PI 陰性： 早期凋亡細胞 (細胞膜磷脂酰絲氨酸外翻，但細胞膜完整性尚存，PI 無法進入)。
Annexin V 陽性 / PI 陽性： 晚期凋亡或壞死細胞 (細胞膜磷脂酰絲氨酸外翻，且細胞膜完整性喪失，PI 可進入細胞核染色)。
Annexin V 陰性 / PI 陰性： 活細胞 (磷脂酰絲氨酸不外翻，細胞膜完整)。
Annexin V 陰性 / PI 陽性： 壞死細胞或機械損傷細胞 (磷脂酰絲氨酸可能未及時外翻或外翻程度低，但膜已破損。這種情況相對少見，更常見的是雙陽性)。
 
主要優勢
1.早期檢測： 能夠檢測凋亡過程中發生得非常早的事件——磷脂酰絲氨酸外翻，遠早于細胞形態發生顯著改變或 DNA 斷裂。這對于研究凋亡的起始機制至關重要。
2.高靈敏度和特異性： Annexin V 對其靶點磷脂酰絲氨酸具有高度特異性和親和力，能可靠地區分凋亡細胞和健康活細胞。
3.定量分析： 尤其是與流式細胞術結合時，可以對群體中處于不同凋亡階段（早期凋亡、晚期凋亡/壞死）的細胞比例進行精確的定量分析。
4.區分凋亡與壞死： 與 PI 等膜不通透性核酸染料聯用，是區分凋亡（尤其是早期）和壞死的最常用且有效的方法之一。
5.操作相對簡便快速： 標準的 Annexin V/PI 染色流程相對簡單，通常可在 1-2 小時內完成，適用于高通量篩選。
6. 多種檢測平臺兼容
流式細胞術： 最常用、最強大的定量分析方法。
熒光顯微鏡： 可進行形態學觀察和定位，適用于貼壁細胞或需要觀察單個細胞的情況。
熒光微孔板讀數儀： 適用于高通量篩選，提供群體水平的熒光強度信息。
激光共聚焦顯微鏡： 提供高分辨率的三維成像。
7.適用于多種細胞類型： 可用于懸浮細胞、貼壁細胞、原代細胞、細胞系等多種樣本。
 
Annexin V 熒光染料憑借其 特異性結合凋亡細胞表面暴露的磷脂酰絲氨酸的核心功能，具有 早期檢測、高靈敏特異、定量分析、區分凋亡/壞死、操作簡便、平臺兼容性好等顯著優勢。它被廣泛應用于基礎生命科學研究和應用醫學研究的眾多領域，特別是在 細胞凋亡檢測、抗腫瘤藥物篩選與機制研究、毒理學評估等方面發揮著不可替代的作用。與膜完整性染料（如 PI）的聯合使用是其標準應用模式。