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實驗室血清的質檢要點、在各細胞系的驗證及其使用的難點總結_abio生物試劑品牌網

abiopp8個月前 (04-16)技術54

你以為細胞培養皿里只是"躺平"?錯!它們可是妥妥的"美食家"。血清——來自血液的黃金液體,就是細胞的滿漢全席!

Section.01
血清: 細胞的“五星級外賣”

血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后,分離出的淡黃色透明液體。


血清核心作用有哪些?

首先,血清可謂細胞食堂!氨基酸、葡萄糖、維生素、脂質、微量元素……營養直接拉滿,細胞干飯不擺爛!

血清還是貼壁神器!纖維連接蛋白、層粘連蛋白等——貼壁細胞的“強力膠”,防止細胞“躺平變圓” (拒絕 996,但貼壁必須穩)。

當然,血清還是實驗 Buff:病毒培養、雜交瘤存活、凍存保護……血清在手,科研不愁!

細胞的“米其林廚房”如何煉成?

血清生產流程:血液采集 → 凝固分離 → 三級過濾 → 質檢分裝 → 冷鏈配送。

圖 1. 血清生產流程圖。

Section.02
質檢內幕:
血清屆的“魔鬼面試”

你以為血清隨便就能上崗?它可是要過五關斬六將!涵蓋質量監控、微生物驗證、生化檢測等諸多環節。當然,實踐出真知!經過客戶實踐驗證的血清才是好血清~


血清的質量檢測

血清的客戶驗證

表 1. 文獻研究中的血清使用及培養參考。

實驗驗證 1:趨化實驗

實驗細胞株:THP -1 cells
培養基:RPMI 1640 +10% FBS +1% P/S
細胞密度:1.5×105 個/孔
培養時間:4 h
實驗結果:Mouse MCP-1 有促進 THP-1 細胞正向定向遷移,且呈現出濃度依賴性。

圖 2. 探究 Mouse MCP-1 對 THP -1 趨化的影響。

 
實驗驗證 2:細胞生長

實驗細胞株:SH-SY5Y cells
培養基:DMEM/F12 培養基 +15% FBS +1% P/S
細胞密度:4.5×103 個/孔
培養時間:48 h
實驗結果:Human Neurofascin 可以促進 SH-SY5Y 細胞突觸延伸。

圖 3. 探究 Human Neurofascin 對 SH-SY5Y 細胞突觸的影響。

 
實驗驗證 3:劃痕實驗

實驗細胞株:AGS cells
培養基:Ham's F-12 + 10% FBS +1% P/S
細胞密度:2×106 個/孔
培養時間:24 h
實驗結果:Human GRIK 抑制 AGS 細胞的損傷后的“愈合”作用。

圖 4. 探究 Human GRIK2 對 AGS 細胞運動的影響。

 
實驗驗證 4:細胞增殖實驗

實驗細胞株:Balb/3T3 cells
培養基:DMEM +10% FBS
細胞密度:3×103 個/孔
培養時間:48 h
檢測試劑:CCK8
實驗結果:Human Amphiregulin 可以促進 Balb/3T3 細胞的增殖,ED50=14.39 ng/mL。

圖 5. 探究 Human Amphiregulin 對 Balb/3T3 細胞增殖的影響。

 
實驗驗證 5:Transwell 遷移實驗

實驗細胞株:PC-3 cells
培養基:Ham's F-12 + 10% FBS +1% P/S
細胞密度:7×104 個/孔
培養時間:24 h
實驗結果:Human Androgen receptor 抑制 PC-3 細胞的遷移,隨著濃度增加,遷移呈現負趨勢。

圖 6. 探究 Androgen receptor 對 PC-3 細胞遷移的影響。

 
MCE 血清在各細胞系中的驗證

 
Section.03
靈魂拷問:
血清使用的終極難題


1. 血清應該如何保存?

經常使用的血清分裝后保存在 -20℃ 即可,長期保存建議保存在 -80℃。反復凍融會導致血清有沉淀析出,建議將大規格血清分裝成單次使用規格后保存,按需取用。


低溫保存,拒絕反復凍融!!!

2. 血清應該如何解凍?

解凍時需要從低溫中取出后,放置于 2-8℃ 冰箱中緩慢解凍,在溶解過程中避免劇烈震蕩,可隔一段時間,緩慢晃動,混合溶解成分并加速溶解過程。不可將血清直接從低溫拿到室溫/25-37℃ 環境中溶解,巨大的溫度變化容易使血清產生絮狀沉淀,且長時間放置在室溫/25-37℃ 環境中,容易使血清中活性物質發生變化,影響細胞生長等。


緩慢升溫,拒絕暴力搖晃!!!

3. 血清溶解后的沉淀是什么?

血清中出現的沉淀物質可能包括纖維蛋白 (絮狀沉淀)、脂蛋白、冷凝集素、玻連蛋白、胎球蛋白、磷酸鈣與草酸鈣 (顯微鏡下小黑點沉淀) 及膽固醇等。


4. 血清在使用之前需要再次過濾?

血清在生產過程中嚴格執行三級過濾 (0.1 μm),標準的無菌操作,不建議在使用前再次過濾,再次過濾可能會導致血清中營養物質減少。


5. 血清在使用前是否需要熱滅活?

熱滅活是指在 56℃,30 min 處理已經完全解凍的血清,熱滅菌可以使血清中的補體去活化。熱滅活血清對于細胞生長只有微小的促進作用或者沒有作用,但通常會導致細胞生長速度慢,血清中 沉淀物顯著增多等問題。非必要,不建議熱滅活。


6. 我要替換我現在使用的血清,應該怎么操作呢?

細胞對于日常培養條件具有適應性,貿然打破會導致它不適應新的生活環境,需要先進行馴化。建議復蘇細胞使用原品牌血清,傳代 1-2 代,細胞狀態穩定后,新血清:原血清=1:3 進行第一次換液,新血清逐代提高至 50%,75%,100%,過程注意監控細胞狀態,穩定情況下傳代,且需要保持較高的傳代密度。


Tips:文末彩蛋~細胞培養的哲學

細胞如頂流明星,血清是獨家營養師——科研圈沒有“湊合”的容身之地,只有“硬核”的生存法則!

 
Section.04
小結

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參考文獻:
[1] Yang J,et al. VSTM2L protects prostate cancer cells agAInst ferroptosis via inhibiting VDAC1 oligomerization and maintaining mitochondria homeostasis. Nat Commun. 2025 Jan 29;16(1):1160.
[2] Han H, et al. Therapeutic potential of monomethyl fumarate and aluminum ion combination in alleviating inflammation and oxidative stress in psoriasis. Redox Biol. 2025 Feb;79:103482. 

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