ChIP技術揭示NURR1在前列腺癌從基因轉錄到腫瘤進展中的調控機制_abio生物試劑品牌網
前列腺癌(prostatecancer,PCa)是一種常見的惡性腫瘤，其進展過程中常常伴隨著癌癥干細胞特性的增強、上皮-間充質轉化（EMT）現象的發生以及對傳統治療的抵抗。Wnt/β-catenin信號通路在胚胎發育、干細胞維持以及癌癥進展中發揮重要作用，其異常激活與多種癌癥的發生發展密切相關。NURR1是一種沒有配體或目前尚未發現配體的孤兒核受體蛋白，原本在多巴胺能神經元發育中發揮關鍵作用，但近年來的研究發現其在多種癌癥中異常表達，并可能參與癌癥進展。然而，NURR1在前列腺癌中的具體作用及其與Wnt/β-catenin信號通路的關系尚不清楚。
近日，南方醫科大學附屬深圳龍華醫院泌尿外科副研究員王鑄博士和香港中文大學醫學院Franky Leung Chan合作研究了核受體NURR1（NR4A2）在前列腺癌中的作用機制，特別是其如何通過調控Wnt/β-catenin信號通路影響前列腺癌的干細胞特性、EMT以及去勢抵抗性前列腺癌（castration-resistant prostate cancer, CRPC）的進展。研究通過一系列體外和體內實驗，結合轉錄組學（RNA-seq）和表觀遺傳學技術（ChIP），揭示了NURR1在前列腺癌中的促癌作用，并提出了其作為潛在治療靶點的可能性。相關研究成果以《Nuclear receptor NURR1 functions to promote stemness and ePIthelial-mesenchymal transition in prostate cancer via its targeting of Wnt/β-catenin signaling pathway》為題發表于《Cell Death & Disease》期刊。深圳易基因為本研究提供測序分析技術服務。
標題：Nuclear receptor NURR1 functions to promote stemness and epithelial-mesenchymal transition in prostate cancer via its targeting of Wnt/β-catenin signaling pathway（核受體 NURR1 通過靶向 Wnt/β-catenin 信號通路促進前列腺癌的干性和上皮-間充質轉化） 發表時間：2024-3-24
發表期刊：Cell Death & Disease
影響因子：IF 8.1/Q1
技術平臺：RNA-seq、ChIP-qPCR（易基因金牌技術）
研究摘要
Wnt/β-catenin信號通路的失調激活是多種癌癥晚期進展中的常見事件。這種信號激活增強了腫瘤的生長，并促進了轉移和治療抵抗。研究表明，該信號通路在癌癥進展過程中對細胞過程（EMT和癌癥干性）具有雙重調控作用。Wnt/β-catenin信號通路的異常激活在前列腺癌以及去勢抵抗性前列腺癌（CRPC）中較為常見。然而，前列腺癌中該通路的轉錄調控因子尚未得到充分研究。NURR1（NR4A2）是一種孤兒核受體，在多巴胺能神經元的發育中發揮重要作用。先前研究表明，NURR1在分離的前列腺癌干細胞（PCSCs）和CRPC異種移植模型中表現出上調。本研究進一步證實了NURR1在前列腺癌中的上調，并在前列腺癌細胞系中表現出增強的表達。功能和分子分析表明，NURR1能夠通過直接轉錄激活CTNNB1（β-catenin）并激活β-catenin來介導Wnt/β-catenin信號通路激活，從而促進體外（癌癥干性和EMT）和體內前列腺癌細胞的腫瘤生長（轉移和去勢抵抗）。此外，本研究還驗證了前列腺癌細胞中NURR1的活性可以通過小分子進行調控，表明NURR1可能是晚期前列腺癌管理的潛在治療靶點。
圖形摘要
研究方法
樣本采集：多種前列腺癌細胞系（包括LNCaP、VCaP、22Rv1、DU 145和PC-3）、永生化前列腺上皮細胞系（BPH-1）。此外還利用前列腺組織微陣列（包含良性前列腺增生和不同Gleason評分的前列腺癌組織）進行免疫組化分析。樣本采集涵蓋從細胞系到臨床組織。
免疫組化和免疫印跡分析：檢測NURR1在前列腺癌組織和細胞系中的表達水平。
RNA測序（RNA-seq）：通過對比NURR1過表達和對照組的前列腺癌細胞系，分析差異表達基因，揭示NURR1可能調控的信號通路。
染色質免疫沉淀（ChIP-qPCR）：驗證NURR1是否直接結合到CTNNB1啟動子區域，從而調控其表達。
報告基因分析和基因編輯技術：通過構建含CTNNB1啟動子的熒光素酶報告基因質粒，以及CRISPR/Cas9介導的基因敲除，驗證NURR1對CTNNB1的轉錄調控作用。
體外和體內功能實驗：包括細胞增殖、遷移、侵襲實驗以及異種移植瘤模型，評估NURR1對前列腺癌細胞生物學行為的影響。
結果圖形
（1）NURR1在前列腺癌組織和前列腺癌細胞中表達上調
通過免疫組化和免疫印跡分析發現，NURR1在前列腺癌組織和細胞系中的表達顯著高于正常前列腺組織和細胞。
圖1：NURR1在臨床前列腺癌組織和前列腺癌細胞系中的表達上調。
A-B. 通過對兩個臨床前列腺癌組織的微陣列數據集進行轉錄組分析，結果顯示NURR1在前列腺癌中表現出上調的表達模式。
C-D. 前列腺癌組織微陣列中NURR1的免疫組化分析。
E. NURR1免疫印跡分析。多種前列腺癌細胞系的NURR1表達水平高于永生化前列腺上皮細胞BPH-1。
（2）轉錄組分析表明NURR1參與Wnt/β-catenin信號激活
RNA-seq和GSEA分析顯示NURR1過表達組中Wnt/β-catenin信號通路顯著富集。
圖 2：Wnt/β-catenin信號通路參與NURR1過表達的前列腺癌
A. DU 145-NURR1和-Vector感染細胞的RNA-seq數據的基因集富集分析（GSEA）氣泡圖。結果顯示，與對照組（Vector）相比，NURR1過表達組（NURR1）中Wnt/β-catenin信號是最顯著富集通路。
B. DU 145-NURR1和-Vector感染細胞以及NURR1高表達和低表達組的GSEA結果，顯示Wnt/β-catenin信號通路的富集情況。
C. 基于NURR1表達水平將患者分為高表達和低表達組，展示TCGA數據庫患者的RNA-seq數據的GSEA氣泡圖。結果顯示，與NURR1低表達組相比，NURR1高表達組中Wnt/β-catenin信號通路顯著富集。
D. 對TCGA數據庫中的前列腺腺癌數據集（PRAD）進行表達分析，結果顯示NR4A2與CTNNB1在原發性前列腺癌組織中呈正相關表達。
E-F. DU 145-NURR1感染細胞和DU 145-shNURR1感染細胞中CTNNB1（β-catenin）表達的RT-qPCR分析。結果顯示，與載體或對照組相比，DU 145-NURR1感染細胞中CTNNB1顯著上調，而DU 145-shNURR1感染細胞中CTNNB1表達下調。
（3）NURR1通過直接轉錄激活CTNNB1來激活前列腺癌細胞中的β-catenin信號通路。
ChIP和報告基因分析進一步證實NURR1能夠直接結合到CTNNB1啟動子并激活其轉錄，進而增加β-catenin的蛋白表達和核內積累。
圖3：NURR1可以通過直接轉錄激活CTNNB1以及激活β-catenin來激活前列腺癌細胞中的Wnt/β-catenin信號通路
A. CTNNB1啟動子的1.3 kb片段驅動的報告基因構建示意圖，以及三個包含點突變NBRE的報告基因構建。
B. 熒光素酶報告基因分析。結果顯示，只有完整的NURR1，而不是其DNA結合域缺失突變體NURR1-ΔDBD，能夠以劑量依賴的方式轉錄激活CTNNB1啟動子驅動的報告基因。然而，NURR1不能轉錄激活包含點突變NBRE的報告基因。
C. 染色質免疫沉淀（ChIP）分析。結果顯示在HEK293細胞中，CTNNB1啟動子上的假定NURR1結合位點富集了NURR1。IgG作為陰性對照。
D-E. AR陽性（LNCaP、22Rv1）和AR陰性（DU 145）前列腺癌細胞中β-catenin的免疫印跡分析，這些細胞分別過表達NURR1或敲低NURR1。結果顯示，LNCaP和DU 145細胞中NURR1的過表達能夠增加總β-catenin及其活性形式（去磷酸化或核內）的蛋白水平，而22Rv1和DU 145細胞中NURR1的敲低則能夠減少這些蛋白水平。然而，在這些前列腺癌細胞中，NURR1的過表達或shRNA敲低并未觀察到非活性或磷酸化β-catenin蛋白水平的顯著變化。
F-G. DU 145和22Rv1細胞中β-catenin信號通路下游調節因子的免疫印跡分析，這些細胞經過NURR1激動劑C-DIM-12（5 μM）或Wnt抑制劑IWP-2（10 μM）處理。
（4）NURR1可以促進前列腺癌細胞的體外干細胞特性和EMT
體外實驗表明，NURR1過表達能夠增強前列腺癌細胞的非貼壁生長能力、遷移和侵襲能力，并誘導EMT相關標志物的表達變化。
圖4：NURR1能夠增強前列腺癌細胞的體外干細胞特性。
A-D. 非貼壁3D培養球體形成實驗。
E-F. NURR1和shNURR1感染株及其經C-DIM-12或IWP-2處理的感染株中前列腺癌干細胞（PCSCs）相關標志物的免疫印跡分析。
（5）NURR1可在體內促進前列腺癌細胞的去勢抵抗
圖5：NURR1能夠增強前列腺癌細胞的體內去勢抵抗性生長（A、B 體內致瘤性實驗）。
A. 顯微照片顯示在去勢后5周，由VCaP-NURR1和VCaP-載體感染細胞在宿主小鼠中生長的異種移植腫瘤，以及經過IWP-2處理的VCaP-NURR1感染細胞形成的腫瘤。
B. 對去勢小鼠中由NURR1感染細胞形成的異種移植腫瘤大小進行半定量分析。
C. 對VCaP-NURR1感染細胞形成的去勢復發性異種移植腫瘤進行免疫印跡分析。
（6）NURR1可能起到促進前列腺癌細胞遷移、侵襲和轉移潛力的作用
圖6：NURR1能夠促進前列腺癌細胞的體外遷移和侵襲能力
A-B. 劃痕愈合實驗。
C-D. Transwell侵襲實驗。
E-F. NURR1和shNURR1感染細胞中EMT標志物的免疫印跡分析。
G. 經C-DIM-12/IWP-2處理或聯合CTNNB1敲除的DU 145-NURR1感染細胞中EMT標志物的免疫印跡分析。
圖7：通過斑馬魚胚胎模型驗證NURR1能夠增強前列腺癌細胞的體內轉移潛力
A. 將RFP（紅色熒光蛋白）標記的PC-3-NURR1/載體感染細胞微注入flk:GFP（綠色熒光蛋白標記血管）斑馬魚胚胎（受精后48小時）發育中的心臟區域。
B. 在注射后第4天，通過熒光顯微鏡觀察到的PC-3-NURR1/載體感染細胞在斑馬魚頭部（頭）和尾部（尾）區域的遷移情況。綠色代表血管，紅色代表PC-3感染細胞。顯微鏡觀察顯示，在注射后第4天，PC-3-NURR1感染細胞在斑馬魚的頭部和尾部區域有顯著數量的細胞遷移，而PC-3-載體感染細胞在這些區域幾乎未被檢測到。然而，經過C-DIM-12處理的斑馬魚中檢測到了大量PC-3-載體感染細胞。另一方面，CTNNB1敲除的PC-3-NURR1感染細胞在斑馬魚的頭部和尾部區域未被檢測到，但在血管中有少量細胞被檢測到。
C. 對遷移至斑馬魚頭部和尾部區域的PC-3-NURR1/載體感染細胞進行定量分析。
D. 對遷移到斑馬魚遠端部位的PC-3-NURR1/載體感染細胞中EMT標志物的表達進行RT-qPCR分析。結果顯示，與PC-3-載體感染細胞相比，遷移的PC-3-NURR1感染細胞表現出增強的EMT標志物表達特征（SNAIL1和KLF4水平增加，E-鈣粘蛋白水平降低）。用C-DIM-12處理斑馬魚能夠顯著增加CD44的表達。CTNNB1敲除的遷移PC-3-NURR1感染細胞顯示出MMP9表達降低。
E. NURR1在晚期前列腺癌中通過直接靶向CTNNB1（β-catenin）促進去勢抵抗性、轉移和癌癥干性的作用機制模式圖。
易小結
本研究結果表明，NURR1在前列腺癌中通過直接調控CTNNB1的轉錄激活Wnt/β-catenin信號通路，進而促進前列腺癌細胞的干細胞特性、EMT、去勢抵抗性和轉移能力。因此，NURR1及其調控的Wnt/β-catenin信號通路可能成為治療前列腺癌的潛在靶點。
RNA-seq和ChIP技術在本研究中的作用
RNA-seq技術：用于分析NURR1過表達對前列腺癌細胞轉錄組的影響。通過對比NURR1過表達和對照組的轉錄組數據，研究人員發現Wnt/β-catenin信號通路在NURR1過表達組中顯著富集，這提示NURR1可能通過調控該信號通路影響前列腺癌的生物學行為。
ChIP技術：用于驗證NURR1是否直接結合到CTNNB1啟動子區域。研究人員通過發現NURR1能夠特異性地結合到CTNNB1啟動子上的一個特定序列（NBRE），從而為NURR1直接調控CTNNB1表達提供了直接證據。
參考文獻：
Zhang, X., Li, H., Wang, Y. et al. Nuclear receptor NURR1 functions to promote stemness and epithelial-mesenchymal transition in prostate cancer via its targeting of Wnt/β-catenin signaling pathway. Cell Death Dis 15, 234 (2024). https://doi.org/10.1038/s41419-024-06621-w
近日，南方醫科大學附屬深圳龍華醫院泌尿外科副研究員王鑄博士和香港中文大學醫學院Franky Leung Chan合作研究了核受體NURR1（NR4A2）在前列腺癌中的作用機制，特別是其如何通過調控Wnt/β-catenin信號通路影響前列腺癌的干細胞特性、EMT以及去勢抵抗性前列腺癌（castration-resistant prostate cancer, CRPC）的進展。研究通過一系列體外和體內實驗，結合轉錄組學（RNA-seq）和表觀遺傳學技術（ChIP），揭示了NURR1在前列腺癌中的促癌作用，并提出了其作為潛在治療靶點的可能性。相關研究成果以《Nuclear receptor NURR1 functions to promote stemness and ePIthelial-mesenchymal transition in prostate cancer via its targeting of Wnt/β-catenin signaling pathway》為題發表于《Cell Death & Disease》期刊。深圳易基因為本研究提供測序分析技術服務。
標題：Nuclear receptor NURR1 functions to promote stemness and epithelial-mesenchymal transition in prostate cancer via its targeting of Wnt/β-catenin signaling pathway（核受體 NURR1 通過靶向 Wnt/β-catenin 信號通路促進前列腺癌的干性和上皮-間充質轉化） 發表時間：2024-3-24
發表期刊：Cell Death & Disease
影響因子：IF 8.1/Q1
技術平臺：RNA-seq、ChIP-qPCR（易基因金牌技術）
研究摘要
Wnt/β-catenin信號通路的失調激活是多種癌癥晚期進展中的常見事件。這種信號激活增強了腫瘤的生長，并促進了轉移和治療抵抗。研究表明，該信號通路在癌癥進展過程中對細胞過程（EMT和癌癥干性）具有雙重調控作用。Wnt/β-catenin信號通路的異常激活在前列腺癌以及去勢抵抗性前列腺癌（CRPC）中較為常見。然而，前列腺癌中該通路的轉錄調控因子尚未得到充分研究。NURR1（NR4A2）是一種孤兒核受體，在多巴胺能神經元的發育中發揮重要作用。先前研究表明，NURR1在分離的前列腺癌干細胞（PCSCs）和CRPC異種移植模型中表現出上調。本研究進一步證實了NURR1在前列腺癌中的上調，并在前列腺癌細胞系中表現出增強的表達。功能和分子分析表明，NURR1能夠通過直接轉錄激活CTNNB1（β-catenin）并激活β-catenin來介導Wnt/β-catenin信號通路激活，從而促進體外（癌癥干性和EMT）和體內前列腺癌細胞的腫瘤生長（轉移和去勢抵抗）。此外，本研究還驗證了前列腺癌細胞中NURR1的活性可以通過小分子進行調控，表明NURR1可能是晚期前列腺癌管理的潛在治療靶點。
圖形摘要
研究方法
樣本采集：多種前列腺癌細胞系（包括LNCaP、VCaP、22Rv1、DU 145和PC-3）、永生化前列腺上皮細胞系（BPH-1）。此外還利用前列腺組織微陣列（包含良性前列腺增生和不同Gleason評分的前列腺癌組織）進行免疫組化分析。樣本采集涵蓋從細胞系到臨床組織。
免疫組化和免疫印跡分析：檢測NURR1在前列腺癌組織和細胞系中的表達水平。
RNA測序（RNA-seq）：通過對比NURR1過表達和對照組的前列腺癌細胞系，分析差異表達基因，揭示NURR1可能調控的信號通路。
染色質免疫沉淀（ChIP-qPCR）：驗證NURR1是否直接結合到CTNNB1啟動子區域，從而調控其表達。
報告基因分析和基因編輯技術：通過構建含CTNNB1啟動子的熒光素酶報告基因質粒，以及CRISPR/Cas9介導的基因敲除，驗證NURR1對CTNNB1的轉錄調控作用。
體外和體內功能實驗：包括細胞增殖、遷移、侵襲實驗以及異種移植瘤模型，評估NURR1對前列腺癌細胞生物學行為的影響。
結果圖形
（1）NURR1在前列腺癌組織和前列腺癌細胞中表達上調
通過免疫組化和免疫印跡分析發現，NURR1在前列腺癌組織和細胞系中的表達顯著高于正常前列腺組織和細胞。
圖1：NURR1在臨床前列腺癌組織和前列腺癌細胞系中的表達上調。
A-B. 通過對兩個臨床前列腺癌組織的微陣列數據集進行轉錄組分析，結果顯示NURR1在前列腺癌中表現出上調的表達模式。
C-D. 前列腺癌組織微陣列中NURR1的免疫組化分析。
E. NURR1免疫印跡分析。多種前列腺癌細胞系的NURR1表達水平高于永生化前列腺上皮細胞BPH-1。
（2）轉錄組分析表明NURR1參與Wnt/β-catenin信號激活
RNA-seq和GSEA分析顯示NURR1過表達組中Wnt/β-catenin信號通路顯著富集。
圖 2：Wnt/β-catenin信號通路參與NURR1過表達的前列腺癌
A. DU 145-NURR1和-Vector感染細胞的RNA-seq數據的基因集富集分析（GSEA）氣泡圖。結果顯示，與對照組（Vector）相比，NURR1過表達組（NURR1）中Wnt/β-catenin信號是最顯著富集通路。
B. DU 145-NURR1和-Vector感染細胞以及NURR1高表達和低表達組的GSEA結果，顯示Wnt/β-catenin信號通路的富集情況。
C. 基于NURR1表達水平將患者分為高表達和低表達組，展示TCGA數據庫患者的RNA-seq數據的GSEA氣泡圖。結果顯示，與NURR1低表達組相比，NURR1高表達組中Wnt/β-catenin信號通路顯著富集。
D. 對TCGA數據庫中的前列腺腺癌數據集（PRAD）進行表達分析，結果顯示NR4A2與CTNNB1在原發性前列腺癌組織中呈正相關表達。
E-F. DU 145-NURR1感染細胞和DU 145-shNURR1感染細胞中CTNNB1（β-catenin）表達的RT-qPCR分析。結果顯示，與載體或對照組相比，DU 145-NURR1感染細胞中CTNNB1顯著上調，而DU 145-shNURR1感染細胞中CTNNB1表達下調。
（3）NURR1通過直接轉錄激活CTNNB1來激活前列腺癌細胞中的β-catenin信號通路。
ChIP和報告基因分析進一步證實NURR1能夠直接結合到CTNNB1啟動子并激活其轉錄，進而增加β-catenin的蛋白表達和核內積累。
圖3：NURR1可以通過直接轉錄激活CTNNB1以及激活β-catenin來激活前列腺癌細胞中的Wnt/β-catenin信號通路
A. CTNNB1啟動子的1.3 kb片段驅動的報告基因構建示意圖，以及三個包含點突變NBRE的報告基因構建。
B. 熒光素酶報告基因分析。結果顯示，只有完整的NURR1，而不是其DNA結合域缺失突變體NURR1-ΔDBD，能夠以劑量依賴的方式轉錄激活CTNNB1啟動子驅動的報告基因。然而，NURR1不能轉錄激活包含點突變NBRE的報告基因。
C. 染色質免疫沉淀（ChIP）分析。結果顯示在HEK293細胞中，CTNNB1啟動子上的假定NURR1結合位點富集了NURR1。IgG作為陰性對照。
D-E. AR陽性（LNCaP、22Rv1）和AR陰性（DU 145）前列腺癌細胞中β-catenin的免疫印跡分析，這些細胞分別過表達NURR1或敲低NURR1。結果顯示，LNCaP和DU 145細胞中NURR1的過表達能夠增加總β-catenin及其活性形式（去磷酸化或核內）的蛋白水平，而22Rv1和DU 145細胞中NURR1的敲低則能夠減少這些蛋白水平。然而，在這些前列腺癌細胞中，NURR1的過表達或shRNA敲低并未觀察到非活性或磷酸化β-catenin蛋白水平的顯著變化。
F-G. DU 145和22Rv1細胞中β-catenin信號通路下游調節因子的免疫印跡分析，這些細胞經過NURR1激動劑C-DIM-12（5 μM）或Wnt抑制劑IWP-2（10 μM）處理。
（4）NURR1可以促進前列腺癌細胞的體外干細胞特性和EMT
體外實驗表明，NURR1過表達能夠增強前列腺癌細胞的非貼壁生長能力、遷移和侵襲能力，并誘導EMT相關標志物的表達變化。
圖4：NURR1能夠增強前列腺癌細胞的體外干細胞特性。
A-D. 非貼壁3D培養球體形成實驗。
E-F. NURR1和shNURR1感染株及其經C-DIM-12或IWP-2處理的感染株中前列腺癌干細胞（PCSCs）相關標志物的免疫印跡分析。
（5）NURR1可在體內促進前列腺癌細胞的去勢抵抗
圖5：NURR1能夠增強前列腺癌細胞的體內去勢抵抗性生長（A、B 體內致瘤性實驗）。
A. 顯微照片顯示在去勢后5周，由VCaP-NURR1和VCaP-載體感染細胞在宿主小鼠中生長的異種移植腫瘤，以及經過IWP-2處理的VCaP-NURR1感染細胞形成的腫瘤。
B. 對去勢小鼠中由NURR1感染細胞形成的異種移植腫瘤大小進行半定量分析。
C. 對VCaP-NURR1感染細胞形成的去勢復發性異種移植腫瘤進行免疫印跡分析。
（6）NURR1可能起到促進前列腺癌細胞遷移、侵襲和轉移潛力的作用
圖6：NURR1能夠促進前列腺癌細胞的體外遷移和侵襲能力
A-B. 劃痕愈合實驗。
C-D. Transwell侵襲實驗。
E-F. NURR1和shNURR1感染細胞中EMT標志物的免疫印跡分析。
G. 經C-DIM-12/IWP-2處理或聯合CTNNB1敲除的DU 145-NURR1感染細胞中EMT標志物的免疫印跡分析。
圖7：通過斑馬魚胚胎模型驗證NURR1能夠增強前列腺癌細胞的體內轉移潛力
A. 將RFP（紅色熒光蛋白）標記的PC-3-NURR1/載體感染細胞微注入flk:GFP（綠色熒光蛋白標記血管）斑馬魚胚胎（受精后48小時）發育中的心臟區域。
B. 在注射后第4天，通過熒光顯微鏡觀察到的PC-3-NURR1/載體感染細胞在斑馬魚頭部（頭）和尾部（尾）區域的遷移情況。綠色代表血管，紅色代表PC-3感染細胞。顯微鏡觀察顯示，在注射后第4天，PC-3-NURR1感染細胞在斑馬魚的頭部和尾部區域有顯著數量的細胞遷移，而PC-3-載體感染細胞在這些區域幾乎未被檢測到。然而，經過C-DIM-12處理的斑馬魚中檢測到了大量PC-3-載體感染細胞。另一方面，CTNNB1敲除的PC-3-NURR1感染細胞在斑馬魚的頭部和尾部區域未被檢測到，但在血管中有少量細胞被檢測到。
C. 對遷移至斑馬魚頭部和尾部區域的PC-3-NURR1/載體感染細胞進行定量分析。
D. 對遷移到斑馬魚遠端部位的PC-3-NURR1/載體感染細胞中EMT標志物的表達進行RT-qPCR分析。結果顯示，與PC-3-載體感染細胞相比，遷移的PC-3-NURR1感染細胞表現出增強的EMT標志物表達特征（SNAIL1和KLF4水平增加，E-鈣粘蛋白水平降低）。用C-DIM-12處理斑馬魚能夠顯著增加CD44的表達。CTNNB1敲除的遷移PC-3-NURR1感染細胞顯示出MMP9表達降低。
E. NURR1在晚期前列腺癌中通過直接靶向CTNNB1（β-catenin）促進去勢抵抗性、轉移和癌癥干性的作用機制模式圖。
易小結
本研究結果表明，NURR1在前列腺癌中通過直接調控CTNNB1的轉錄激活Wnt/β-catenin信號通路，進而促進前列腺癌細胞的干細胞特性、EMT、去勢抵抗性和轉移能力。因此，NURR1及其調控的Wnt/β-catenin信號通路可能成為治療前列腺癌的潛在靶點。
RNA-seq和ChIP技術在本研究中的作用
RNA-seq技術：用于分析NURR1過表達對前列腺癌細胞轉錄組的影響。通過對比NURR1過表達和對照組的轉錄組數據，研究人員發現Wnt/β-catenin信號通路在NURR1過表達組中顯著富集，這提示NURR1可能通過調控該信號通路影響前列腺癌的生物學行為。
ChIP技術：用于驗證NURR1是否直接結合到CTNNB1啟動子區域。研究人員通過發現NURR1能夠特異性地結合到CTNNB1啟動子上的一個特定序列（NBRE），從而為NURR1直接調控CTNNB1表達提供了直接證據。
參考文獻：
Zhang, X., Li, H., Wang, Y. et al. Nuclear receptor NURR1 functions to promote stemness and epithelial-mesenchymal transition in prostate cancer via its targeting of Wnt/β-catenin signaling pathway. Cell Death Dis 15, 234 (2024). https://doi.org/10.1038/s41419-024-06621-w
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