方案摘要：霉菌和酵母菌總數是衡量牙膏衛生質量的重要指標，一般而言，這些指標數值越高，表明產品的衛生狀況越不理想。依據《GB/T 8372 - 2017 牙膏》的規定，牙膏產品需符合以下衛生標準：菌落總數應控制在≤500 CFU/g，霉菌和酵母菌總數應≤100 CFU/g。本方法利用RAYPA培養基自動制備分裝儀及自動菌落計數儀達到對培養基的快速制備和對牙膏中霉菌和酵母菌含量的快速檢測，為牙膏衛生質量的評估提供高效、準確的技術支持。

 
方案詳情：
實驗原理牙膏檢樣經處理后，在特定條件下培養，通過計數每 1g 檢樣中形成的霉菌和酵母菌總數，可判斷牙膏被此類微生物的污染程度及整體衛生狀況。本方法基于霉菌和酵母菌的獨特形態及培養特性，采用虎紅培養基，于 28℃±2℃恒溫培養 5 天，使用菌落計數儀對培養基上生長的霉菌和酵母菌菌落進行快速計數。
 
二、實驗準備
1、儀器和設備
① 恒溫培養箱：28℃±2℃。
② 振蕩器。
③ 三角瓶：250 mL。
④ 試管：18 mm×150 mm。
⑤ 滅菌平皿：直徑90 mm。
⑥ PIpetty電動移液器：10 mL量程
⑦ 量筒：200 mL。
⑧ 酒精燈。
⑨ 高壓滅菌器。
⑩ 恒溫水浴箱。
? 自動菌落計數儀SHASHIN KAGAKU，PSF-1100。
? RAYPA培養基自動制備分裝儀
 
2、培養基和試劑
① SCDLP液體培養基
② 虎紅（孟加拉紅）培養基
 
二、操作步驟
1、使用RAYPA培養基自動制備分裝儀、自動制備實驗所需的培養基，并分裝到平皿。
2、樣品稀釋：用Pipetty電動移液器吸取1:10的檢液2 mL，分別注入到兩個滅菌平皿內，每皿1 mL。另取1 mL注入到9 mL SCDLP液體培養基（或經過驗證等效或優于SCDLP的稀釋液）試管中（注意勿使吸頭接觸液面），并充分混勻，制成1:100檢液，更換吸頭，吸取2 mL，分別注入到兩個滅菌平皿內，每皿1 mL。樣品至少需進行1:10和1:100稀釋，如樣品含菌量高，還可再稀釋成1:1000，1:10000，……等，每個稀釋度都需要更換1個吸頭。

 
3、取樣品稀釋液各2 mL，分別注入2個滅菌平皿內，每皿1 mL，注入融化并冷卻至44℃~48℃的虎紅培養基，充分搖勻。凝固后，翻轉平板，置28℃±2℃培養5 d，觀察并記錄。同時吸取1 mL空白稀釋液加入滅菌空平皿中，加入約15 mL虎紅培養基，待瓊脂凝固后，翻轉平皿，置28℃±2℃培養箱內培養5 d，為空白對照。
三、計算方法
1、在自動菌落計數儀上按照表一的數值，設置好條件。
2、使用自動菌落計數儀，快速識別重疊或模糊的菌落，1-3秒出結果后保存，繼續識別其它的培養皿，直到所有培養皿計算完畢。
3、計算出每個培養皿上生長的霉菌和酵母菌菌落數后，求出每個稀釋度的平均菌落數。
 
四、結果及報告
1、判定結果時，應選取菌落數在5 CFU~50 CFU范圍之內的平皿計數，乘以稀釋倍數后，即為每g檢樣中所含的霉菌和酵母菌總數。
2、其他范圍內的菌落數報告：
① 首先選取平均菌落數在30~300之間的平皿，作為菌落總數測定的范圍。當只有一個稀釋度的平均菌落數符合此范圍時，即以該平皿菌落數乘其稀釋倍數報告之（見表1中例1）。
② 若有兩個稀釋度，其平均菌落數均在30~300之間， 則應求出兩菌落總數之比值來決定，若其比值小于或等于2，應報告其平均數，若大于2則以其中稀釋度較低的平皿的菌落數報告之（見表1中例2及例3）。
③ 若所有稀釋度的平均菌落數均大于300，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之（見表1中例4）。
④ 若所有稀釋度的平均菌落數均小于30，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之（見表1例5）。
⑤ 若所有稀釋度的平均菌落數均不在30~300之間，其中一個稀釋度大于300，而相鄰的另一稀釋度小于30時，則以接近30或300的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之（見表1中例6）。
⑥ 若所有的稀釋度均無菌生長，報告數為每g小于10 CFU。
⑦ 菌落計數的報告，菌落數在10以內時，按實有數值報告之，大于100時，采用二位有效數字，在二位有效數字后面的數值，應以四舍五入法計算。為了縮短數字后面零的個數，可用10的指數來表示（見表1報告方式欄）。在報告菌落數為“不可計”時，應注明樣品的稀釋度。


 
3、每g牙膏含霉菌和酵母菌總數以CFU/g表示。